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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 询问培养基调pH时的问题
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zhen_fang

银虫 (正式写手)
引用回帖:
10楼: Originally posted by 雨帘静思 at 2012-05-08 11:01:15:
谢谢您了。。。。灭菌之后是有沉淀的。这样会不会影响培养基的成分？

如果你一直使用这个培养基，形成对比，应该不需要考虑沉淀问题
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11楼2012-05-08 11:54:43
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wgy2007

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
玉米浆的质量不稳定，对微生物的培养会有一定的影响，可以根据总氮或氨基氮调节配比。如果用量不大的话可以买点玉米浆干粉替代玉米浆使用效果会好了一些，我是做细菌素发酵的，以前做种子时用玉米浆，偶尔也会出现种子不长的情况，后来种子培养基改用玉米浆干粉，上海西王的，现在一直在用，效果不错，再没有出现过种子不长的情况。菌种保藏用20-25％的无菌甘油洗下孢子，1ml/冻存管 -80度保藏。使用时斜面或平板活化即可。
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12楼2012-05-08 14:32:21
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wgy2007

木虫 (小有名气)
我们灭菌前调pH7.0-7.5，灭菌后会有很多沉淀的，不影响微生物的生长。
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13楼2012-05-08 14:34:51
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雨帘静思

铁杆木虫 (正式写手)
雨帘静思: 回帖置顶 2012-05-08 14:45:21
引用回帖:
12楼: Originally posted by wgy2007 at 2012-05-08 14:32:21:
玉米浆的质量不稳定，对微生物的培养会有一定的影响，可以根据总氮或氨基氮调节配比。如果用量不大的话可以买点玉米浆干粉替代玉米浆使用效果会好了一些，我是做细菌素发酵的，以前做种子时用玉米浆，偶尔也会出现 ...

如果改为玉米浆干粉的情况下，加量应该如何计算？
你们测量总氮或者是氨基氮的方法是什么？
菌种保藏的甘油的20-25%是其终浓度还是无菌甘油的浓度？
再请教您一个问题，我们在上罐之前需要接斜面，然后摇瓶，上罐。但是我们接斜面的一代斜面是通过甘油管划好在斜面上生长出来的。而且一代斜面就是直接放在4°C的冰箱里面，这样的话时间长了会不会对一代斜面上的菌种活力产生一定不良的影响。
可不可以通过每次进行接斜面之前首先从甘油管中划斜面，然后在转接至二代斜面，进行上罐？
谢谢。。。
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14楼2012-05-08 14:44:58
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雨帘静思

铁杆木虫 (正式写手)
引用回帖:
13楼: Originally posted by wgy2007 at 2012-05-08 14:34:51:
我们灭菌前调pH7.0-7.5，灭菌后会有很多沉淀的，不影响微生物的生长。

谢谢您。。。
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15楼2012-05-08 14:45:11
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wgy2007

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

雨帘静思: 回帖置顶 2012-05-09 13:34:21
测总氮用凯氏定氮法，我们是用定氮仪测的，方法很简单，氨基氮是用甲醛滴定法测的，方法在网上应该能查到，如果查不到给我个邮箱号，我发给你。
按总氮加玉米浆干粉的计算方法：
玉米浆干粉加入的比例＝培养基中玉米浆的量×玉米浆的总氮/玉米浆干粉的总氮
按氨基氮加入玉米浆干粉的计算方法：
玉米浆干粉加入的比例＝培养基中玉米浆的量×玉米浆的氨基氮/玉米浆干粉的氨基氮
玉米浆干粉具体的加量还是要根据实验来确定。
用20-25％无菌甘油洗下孢子，即是终浓度。
一代斜面最多在4度冰箱冷藏1-2个月，时间长了会对活力产生影响。
我们使用甘油管先传一代斜面，用一代斜面传二代斜面，再接种摇瓶。一般是甘油管保藏菌种多做，现用现传，做甘油管保藏的菌种最好用克氏瓶培养，这样可以多做一些甘油管。如果是做实验不是生产用的话，可以考虑甘油管保藏的菌种直接接种摇瓶种子，我做过一种放线菌产抗生素的培养，就是直接用甘油管接种摇瓶，培养24小时后再用摇瓶种子接种摇瓶扩大培养，摇瓶种子长好后接种实验罐。
希望对你有帮助
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16楼2012-05-09 12:36:53
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雨帘静思

铁杆木虫 (正式写手)
引用回帖:
16楼: Originally posted by wgy2007 at 2012-05-09 12:36:53:
测总氮用凯氏定氮法，我们是用定氮仪测的，方法很简单，氨基氮是用甲醛滴定法测的，方法在网上应该能查到，如果查不到给我个邮箱号，我发给你。
按总氮加玉米浆干粉的计算方法：
玉米浆干粉加入的比例＝培养基中 ...

您好。
麻烦您把总氮和氨基氮的方法发给我，谢谢。
邮箱 hz.luo@hotmail.com
保藏的甘油管是普通的离心管还是其他的器皿？
我们的玉米浆是直接放在-20°C的冰箱里面，用的时候直接解冻，可是由于我们买的玉米浆是3年前买的，会不会其的营养成分发生了变化？如何判断玉米浆的正常情况？
很感谢您的解答，受益匪浅。。。。
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17楼2012-05-09 13:34:18
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suhaoxiang

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

引用回帖:
8楼: Originally posted by 雨帘静思 at 2012-05-08 10:58:54
谢谢，你们调含有玉米浆的培养基的pH是多少？以前用种子培养基接种后会生长，可是在这几批次的接种之后菌种并没有生长，也没有染菌。。不知道为什么？但是菌种接到斜面上（斜面培养基成分与种子培养基不同，不含有 ...

我也是做头孢发酵的，和你一样，发酵罐PH调到7.4
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别拿失败找借口
18楼2013-07-24 23:10:12
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