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依然自然

新虫 (小有名气)

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[求助] RNA提取时，浓度4252.2，A260/280=1.99，但电泳跑不出RNA，原因是？已有10人参与

我在提取RNA时，取样0.1g，新鲜样品现磨，用的Trizol提取法。结果RNA的浓度可以，2.0>A260/280>1.8，A260/230>2.0。但跑胶时没有RNA出现，只有点样孔很亮，和DNA Marker条带（图1）。跑胶时采用点样体系：DNA Loading Buffer、DNA Marker、Gel stain（核酸染料）各2ul，上样量2ul。跑胶条件：U=100V、I 随意，时间12min。出现问题之后，我采用大电泳槽电泳，电泳条件为：U=220V、I 随意、时间15min。结果是RNA拖尾，DNA Marker更清楚（图2）。请问这种问题可能是由于什么原因造成的？谁有好主意接下来我该做些什么测试才能找出问题和解决问题？谢谢！

图1.jpg

RNA提取时，浓度4252.2，A260/280=1.99，但电泳跑不出RNA，原因是？-1

图2.jpg

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生命就如旅行。。。。所以要一直笑着

1楼 2015-05-13 10:52:51

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luwei13566

木虫 (正式写手)

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【答案】应助回帖

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依然自然(西门吹雪170代发): 金币+2, 鼓励回帖交流 2015-05-15 19:34:31

1.提取RNA的时候RNA的颜色有没有变深？
2.如果真是多糖多酚污染的话，听说有一种CTAB提植物RNA的方法，LZ可以去查一查。
3.其实可能最简便的解决方法就是把你现在提取样品稀释个100倍再跑个胶看看，你提的浓度那么大，随便混杂点多酚沉淀就把你点样孔给堵了，先先稀释了跑一下看看能不能跑出孔，如果实在是你RNA全给结合了话只有试一试专门的试剂盒了！~你的提取方法是没有问题的