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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 药学 » 药代动力学 » LC-MS/MS法做药动学 提取回收率问题
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stingdhk

铁杆木虫 (著名写手)

[交流] LC-MS/MS法做药动学 提取回收率问题

LC-MS/MS法做药动学，样品预处理是乙腈沉淀蛋白，内标是用的待测物的氘代内标，关于提取回收率
有这样的疑问：1  沉淀蛋白法的回收率通常都应该是接近100%吗？我的待测物回收率只有88%左右，老师觉得不太对
                         2 我用的氘代内标，理化性质都和我的待测物相近，但现在是内标的提取回收率接近100%（97%左右），待测物却只有88%
可能的原因是什么呢？
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1楼 2015-05-11 09:24:54
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renzhichu525

银虫 (小有名气)
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stingdhk: 金币+1 2015-05-13 19:13:01
需要说一下你的回收率实验操作和计算方法。
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2楼2015-05-11 14:45:21
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810043138
3楼2015-05-11 14:59:06
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rosegarden

金虫 (正式写手)
★ ★
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stingdhk: 金币+1 2015-05-13 19:13:12
你们老师是外行吧，这个很正常。
FDA和EMA对生物样品分析的回收率都没有死规定，只要你低中高浓度三个水平的回收率的CV%在15%以内就可以了
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坚持
4楼2015-05-11 20:55:49
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stingdhk

铁杆木虫 (著名写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by rosegarden at 2015-05-11 20:55:49
你们老师是外行吧，这个很正常。
FDA和EMA对生物样品分析的回收率都没有死规定，只要你低中高浓度三个水平的回收率的CV%在15%以内就可以了

外行倒不至于，你说的规定我都知道，只不过是觉得为什么待测物和它的同位素内标会差这么多？有没有合理的原因解释一下呢
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5楼2015-05-12 07:37:21
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stingdhk

铁杆木虫 (著名写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by renzhichu525 at 2015-05-11 14:45:21
需要说一下你的回收率实验操作和计算方法。

这个和操作、计算方法没有关系吗？做的是相对提取回收率，氘代内标是氘代了7个H，其他的内标和待测物都是同步的，计算方法也都一样
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6楼2015-05-12 07:39:09
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renzhichu525

银虫 (小有名气)
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引用回帖:
6楼: Originally posted by stingdhk at 2015-05-12 07:39:09
这个和操作、计算方法没有关系吗？做的是相对提取回收率，氘代内标是氘代了7个H，其他的内标和待测物都是同步的，计算方法也都一样...

那你处理过程中不要加内标，把你的标准品和内标物分别加到血浆里，配成一样的浓度再考察回收率。你内标回收率是这么做的吗？
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7楼2015-05-12 12:11:25
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stingdhk

铁杆木虫 (著名写手)
引用回帖:
7楼: Originally posted by renzhichu525 at 2015-05-12 12:11:25
那你处理过程中不要加内标，把你的标准品和内标物分别加到血浆里，配成一样的浓度再考察回收率。你内标回收率是这么做的吗？...

搞不懂你的意思
提取回收率简单说就是经提取/ 未提取；经提取的就是加标准品和内标后正常沉淀蛋白处理，未提取就是把标准品和内标加到提取完的空白上清液中，配制成相同浓度。待测物和内标的回收率操作和计算都是同步的。。
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8楼2015-05-12 13:46:35
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一定一定

新虫 (小有名气)
★
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蛋白沉淀的回收率不高似乎
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9楼2015-05-13 09:20:32
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renzhichu525

银虫 (小有名气)
★
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引用回帖:
8楼: Originally posted by stingdhk at 2015-05-12 13:46:35
搞不懂你的意思
提取回收率简单说就是经提取/ 未提取；经提取的就是加标准品和内标后正常沉淀蛋白处理，未提取就是把标准品和内标加到提取完的空白上清液中，配制成相同浓度。待测物和内标的回收率操作和计算都是 ...

我的意思是：
A.加标准品后正常沉淀蛋白处理，把标准品加到提取完的空白上清液中，配制成相同浓度，计算标准品的回收率；
B.加内标品正常沉淀蛋白处理，把内标品加到提取完的空白上清液中，配制成相同浓度，计算内标品的回收率；

这样子来比较一下两个的回收率。
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10楼2015-05-13 12:28:49
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