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0水晶葡萄0

金虫 (小有名气)

[求助] 关于血样的处理问题 已有3人参与

老鼠用乌拉坦麻醉,灌胃给药,在一定时间眼眦取血,离心,取上清液,放入冰箱中冷冻。用之前,取出溶解,放入600ul乙醇沉淀蛋白,一种方法是涡旋,离心,取上清液进样(液相),另一种方法是超声,离心,取上清液进样。结果,第一种方法,五只老鼠测出的血药浓度差异很大;第二种方法,测定不到药物的峰。
问题:1、用乌拉坦麻醉会影响老鼠对药物的吸收吗?
2、涡旋时间的长短对血药浓度的测定影响很大吗?
3、超声会使药物完全和蛋白结合,二=而检测不到药物峰吗?
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畅_畅

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
0水晶葡萄0: 金币+2, ★★★很有帮助, 好的,谢谢。我用的是大鼠,涡旋也是为了萃取药物。谢谢你的回复 2014-03-10 10:39:58
PSA: 金币+2, 3u 2014-03-10 10:58:38
1.不知你用的大鼠还是小鼠,小鼠眼球取血我没有进行麻醉,而大鼠也不是注射麻药的,只是在取血的时间点用乙醚熏一下,我听说乌拉坦可能会影响药物吸收,但是没有查到过直接的文献证据;2.涡旋是为了萃取药物吗?如果是为了萃取药物的话,那涡旋效果对最后的检测影响很大。一定要涡旋充分;3.不太清楚你具体是什么药物,是否跟蛋白有结合的可能,所以不知道是哪出了问题。但是我觉得至少不应该完全检测不到吧?
2楼2014-03-10 10:15:45
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liuzhaomin

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
0水晶葡萄0: 金币+1, 有帮助 2014-03-10 14:46:42
xiaoxiao270: 金币+1, 3Q 2014-08-22 14:05:10
血样采集方法问题不大。
样品处理步骤通常不这样操作,一般会用液液萃取,用乙醇或者乙腈沉淀蛋白效果不好,容易堵色谱柱。
3楼2014-03-10 14:40:01
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0水晶葡萄0

金虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by liuzhaomin at 2014-03-10 14:40:01
血样采集方法问题不大。
样品处理步骤通常不这样操作,一般会用液液萃取,用乙醇或者乙腈沉淀蛋白效果不好,容易堵色谱柱。

药物在乙醇中溶解度很大,所以选择用乙醇沉淀蛋白,你们一般用什么沉淀蛋白呢?即使堵色谱柱,也不至于出现不出峰的情况或者每只老鼠处理后数据差异那么大吧?
4楼2014-03-10 14:46:34
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liuzhaomin

金虫 (著名写手)


xiaoxiao270: 金币+1, 3Q 2014-08-22 14:05:16
引用回帖:
4楼: Originally posted by 0水晶葡萄0 at 2014-03-10 14:46:34
药物在乙醇中溶解度很大,所以选择用乙醇沉淀蛋白,你们一般用什么沉淀蛋白呢?即使堵色谱柱,也不至于出现不出峰的情况或者每只老鼠处理后数据差异那么大吧?...

你这是什么化合物,先查查文献,或许已有现成的处理方法
5楼2014-03-10 15:48:09
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zhangjingle

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖


xiaoxiao270: 金币+1, 多谢 2014-08-22 14:05:21
1、应该不至于导致5只老鼠的血药浓度差异那么大,我们平常用的10%水合氯醛,1ml/250g。
2、有可能是你在涡旋的时候,每次涡旋的力量不同,导致提取出来的药物浓度不同,涡旋的时间长短只会导致药物的提取回收率的问题,而不是5只老鼠的血药浓度差异很大。
3、 超声不会导致药物提取不出来,有可能是药物在超声的过程中不稳定
6楼2014-08-22 09:43:36
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