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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 新药研发 » 质量控制 » 生物样品LC-MS-MS分析超出线性范围最高点10倍解决方案
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zhychen2008

至尊木虫 (著名写手)

[交流] 生物样品LC-MS-MS分析超出线性范围最高点10倍解决方案

UPLC-MS-MS检测生物样本时，第一点浓度太高，处理后浓度达到20ug/ml，超出所设置线性范围；
而第二点刚好在线性范围内（线性范围为20ng-2000ng），当然更高浓度范围是否线性未考察；
目前考察线性范围最高点2000ng时，峰面积约800000，峰高约100000
因此考虑稀释第一点样本，但需稀释约10倍，不知是否可行

另外药审中心上一篇技术指南上说；线性范围设置为最高点浓度的120%，最低点设置为最低点浓度的80%。 因此如果稀释是否和上述要求矛盾，有何解决办法？ 希望各位虫友谈谈自己的看法

[ 来自科研家族 靶向给药系统家族 ]

[ Last edited by zhychen2008 on 2011-11-6 at 09:32 ]
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1楼2011-11-06 09:31:29
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april110016

金虫 (小有名气)
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zhychen2008(金币+2): 多谢回帖交流 2011-11-07 13:24:53
先做预试，如果你的样品有很多点超限的话，说明你的线性范围设置并不合理，可以再宽一些。如果只是个别点出乎意料的超限的话，可以做稀释QC，也就是你的样品如果要稀释10倍，就以相同方法将一定浓度的标液用空白血浆稀释10倍，做成稀释QC，这时不需要单独跟线，跟稀释ＱＣ就可以了
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9楼2011-11-06 20:30:53
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普通回帖

sysybx001

禁虫 (初入文坛)
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lk590(金币+2): 谢谢参与 2011-11-06 11:18:34
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2楼2011-11-06 09:38:39
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zhychen2008

至尊木虫 (著名写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by sysybx001 at 2011-11-06 09:38:39:
线性范围是要根据你要检测的血药浓度的范围来确定的，而且所谓的线性范围的浓度指的是折算成血浆内的药物浓度，跟你稀释或浓缩的倍数没有关系，因为线性样品和实际血浆样品的处理方法和过程应该是完全一致的。
我 ...

这个理解，现在的问题是：处理后样本第一点浓度是绘制的标准曲线最高浓度的10倍，该如何处理呢？
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3楼2011-11-06 09:45:28
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sysybx001

禁虫 (初入文坛)
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小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
zhychen2008(金币+1): 感谢回帖交流 2011-11-06 09:59:58
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4楼2011-11-06 09:56:11
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zhychen2008

至尊木虫 (著名写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by sysybx001 at 2011-11-06 09:56:11:
那说明你的线性范围不合理，需要将线性范围扩大到能达到最高点120%的浓度，而且你最好把所有样品都做完后确定了最高浓度后再确定线性的最高浓度，因为第一个点不一定就是最高浓度点

这个理解，但是现在使用的是UPLC-MS-MS, 如果将最高点浓度设置为120%浓度点，担心超出机器范围，造成污染，前面waters XEVO TQ的液质联用机器，由于有人进样高浓度样品，导致机器经常不稳定
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5楼2011-11-06 09:59:42
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sysybx001

禁虫 (初入文坛)
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小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
lk590(金币+1): 谢谢参与 2011-11-06 11:18:58
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6楼2011-11-06 10:52:52
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sysybx001

禁虫 (初入文坛)
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lk590(金币+1): 谢谢参与 2011-11-06 11:19:05
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7楼2011-11-06 10:54:30
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zhychen2008

至尊木虫 (著名写手)
引用回帖:
6楼: Originally posted by sysybx001 at 2011-11-06 10:52:52:
这个也没问题的，只要在样品处理的过程中用较大量的流动相复溶、把进样的浓度减小就可以了，其实你这种情况跟一般的情况不同：一般情况下由于仪器的灵敏度较差，都希望尽量浓集；你这种情况只需要在最后一步复溶的 ...

如果稀释，还能用同一条标准曲线进行计算吗？

此外，采用的是内标法，复溶时采用更大量的流动相，内标也进行了稀释，需不需要验证稀释是否可行？
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8楼2011-11-06 13:35:38
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sysybx001

禁虫 (初入文坛)
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小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
zhychen2008(金币+1): 感谢回帖交流 2011-11-07 13:33:26
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10楼2011-11-07 09:35:53
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caicaiseven

银虫 (初入文坛)
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小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
lk590(金币+1): 谢谢参与 2011-11-07 11:25:25
可以把标曲的高点做高，但是处理样品的时候要用血浆稀释，算一下稀释因子就可以了
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11楼2011-11-07 10:47:09
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zhychen2008

至尊木虫 (著名写手)
引用回帖:
9楼: Originally posted by april110016 at 2011-11-06 20:30:53:
先做预试，如果你的样品有很多点超限的话，说明你的线性范围设置并不合理，可以再宽一些。如果只是个别点出乎意料的超限的话，可以做稀释QC，也就是你的样品如果要稀释10倍，就以相同方法将一定浓度的标液用空白血 ...

现在一个问题是我的样本量很少，最多5ul，我是用重量进行定量的，请问可以在加了内标之后直到N2吹干后流动相复溶时进行稀释吗
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12楼2011-11-07 13:27:13
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zhychen2008

至尊木虫 (著名写手)
引用回帖:
10楼: Originally posted by sysybx001 at 2011-11-07 09:35:53:
你的标准曲线的制备方法必须与样品处理方法一致，也就是说：如果你的样品稀释了，那么标准曲线制备的时候也必须要稀释。
这个验证不必单独做，因为在做这种体内内标法的样品时，只要主药和内标提取率能达到要求 ...

您的意思是说，这样的话还是不可以使用原来的标准曲线了吗？谢谢
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13楼2011-11-07 13:34:44
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sysybx001

禁虫 (初入文坛)
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小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
lk590(金币+1): 谢谢参与 2011-11-07 19:30:23
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14楼2011-11-07 15:59:10
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kkbyb

木虫 (著名写手)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
lk590(金币+1): 谢谢参与 2011-11-07 19:30:31
方法有二，一如sysybx001 所说意思，标准曲线范围扩大，使最高点囊括近来；二如caicaiseven 所说，把超过点在样品处理前先用空白血浆稀释使他符合现在标准曲线范围。没有其他合理做法
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15楼2011-11-07 17:06:31
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zhychen2008

至尊木虫 (著名写手)
引用回帖:
15楼: Originally posted by kkbyb at 2011-11-07 17:06:31:
方法有二，一如sysybx001 所说意思，标准曲线范围扩大，使最高点囊括近来；二如caicaiseven 所说，把超过点在样品处理前先用空白血浆稀释使他符合现在标准曲线范围。没有其他合理做法

现在的问题是标准曲线范围难以包括最高浓度点

其次，我的样品是吸附在滤纸上的泪液，不是完全均一血浆，因此不知稀释是否均匀
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16楼2011-11-08 10:44:06
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zhychen2008

至尊木虫 (著名写手)
经验证得知，稀释混合不够均匀，稀释后只能回收率只有70%，继续考虑优化方法
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17楼2011-11-20 21:02:44
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zhychen2008

至尊木虫 (著名写手)
引用回帖:
15楼: Originally posted by kkbyb at 2011-11-07 17:06:31:
方法有二，一如sysybx001 所说意思，标准曲线范围扩大，使最高点囊括近来；二如caicaiseven 所说，把超过点在样品处理前先用空白血浆稀释使他符合现在标准曲线范围。没有其他合理做法

已经验证，无法将线性范围最高点扩大。其次经验证得知，稀释混合不够均匀，稀释后只能回收率只有70%，继续考虑优化方法
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18楼2011-11-20 21:04:09
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kkbyb

木虫 (著名写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
意志上支持一下，对于版主说的这个生物样品在下的确没做过，没有经验
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19楼2011-11-21 15:16:56
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guohaiheng

木虫 (正式写手)
  不懂啊
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20楼2011-12-09 00:04:00
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basiabu

木虫 (正式写手)
★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
zhychen2008: 金币+2, 如果是加内标进行处理，内标的量该如何控制呢？ 2012-04-02 00:06:47
楼主以及各位高手考虑的比较细致。
通常我们做体内药物分析的时候，首先做预实验先确定标准曲线范围，如果范围很大，就考虑高浓度点稀释，然后再考察稀释准确性，当然这个过程中需要注意所有溶液的合理性。如果样品处理前稀释不方便，就在复溶的时候再稀释，并考察此操作条件下的准确度。用同一份标准曲线计算结果。
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21楼2012-04-01 08:32:39
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zhychen2008

至尊木虫 (著名写手)
引用回帖:
4504390楼: Originally posted by basiabu at 2012-04-01 08:32:39:
楼主以及各位高手考虑的比较细致。
通常我们做体内药物分析的时候，首先做预实验先确定标准曲线范围，如果范围很大，就考虑高浓度点稀释，然后再考察稀释准确性，当然这个过程中需要注意所有溶液的合理性。如果样 ...

如果是复溶的时候再稀释，并且样品加内标进行处理，内标的量该如何控制呢？
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22楼2012-04-02 00:07:29
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basiabu

木虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
4505953楼: Originally posted by zhychen2008 at 2012-04-02 00:07:29:
如果是复溶的时候再稀释，并且样品加内标进行处理，内标的量该如何控制呢？

被测成分与内标的峰面积比值应该是不变的呀，所以再稀释的时候不需要考虑内标呀，稀释后的浓度也在线性内，稀释准确度也复合要求，那么结果就是可信可用的。

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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23楼2012-04-02 10:30:09
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basiabu

木虫 (正式写手)
引用回帖:
4505953楼: Originally posted by zhychen2008 at 2012-04-02 00:07:29:
如果是复溶的时候再稀释，并且样品加内标进行处理，内标的量该如何控制呢？

被测成分与内标的峰面积比值应该是不变的呀，所以再稀释的时候不需要考虑内标呀，稀释后的浓度也在线性内，稀释准确度也复合要求，那么结果就是可信可用的。

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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24楼2012-04-02 10:31:51
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zhychen2008

至尊木虫 (著名写手)
引用回帖:
4506186楼: Originally posted by basiabu at 2012-04-02 10:31:51:
被测成分与内标的峰面积比值应该是不变的呀，所以再稀释的时候不需要考虑内标呀，稀释后的浓度也在线性内，稀释准确度也复合要求，那么结果就是可信可用的。

既然系时候峰面积比值是不变的，而内标法是更加峰面积比值进行线性拟合的，这样高浓度的比值还是落在线性范围外啊？不知是否可以这样理解？
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25楼2012-04-02 23:15:41
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basiabu

木虫 (正式写手)
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4507221楼: Originally posted by zhychen2008 at 2012-04-02 23:15:41:
既然系时候峰面积比值是不变的，而内标法是更加峰面积比值进行线性拟合的，这样高浓度的比值还是落在线性范围外啊？不知是否可以这样理解？

我的理解是线性范围是浓度范围，不是内标比值范围，所以，高浓度样品在复溶的时候，只是浓度值降低了，降到线性范围内，我没说错吧？因为说实话，在看到你回复之前我还真没想过你说的内容。
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26楼2012-04-04 20:00:50
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匿名


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27楼2013-05-21 22:38:09
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匿名


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28楼2013-05-21 22:40:52
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匿名


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29楼2013-05-21 22:47:06
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