应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 药学 » 药代动力学 » 生物样品前处理问题
101/1返回列表
查看: 3210  |  回复: 9
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

qazw

新虫 (初入文坛)

[求助] 生物样品前处理问题

最近做药动，对于样品前处理的沉淀蛋白法不太理解。用与水项混溶的有机溶剂沉淀蛋白时，比如说用乙腈，我取500ul血浆，加入500ul乙腈，涡旋离心后要取上清进样，但是上清的总体积我不知道，取一定量上清进样的话，提取回收率该怎么算呢？上清液的总体积用不用知道呢？请高手指点迷津。
例：取肝素抗凝血浆600uL，置10mL具塞离心试管中，依次加入内标溶液50ul和乙腈3mL，涡旋混合，离心，分取上清，于40℃氮气流下吹干，残渣加入流动相80ul，涡旋，高速
离心(16000rpm/min)10min，取上清液20uL，注入高效液相色谱仪。
这个过程中“分取上清”是把上清液完全取出吗？并且要确定总的上清量吗？如果不是的话，那提取回收率该怎么算呢？
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2012-06-13 23:21:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

liuyuanzuo

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
中药2000: 金币+1, 谢谢 2012-06-14 22:27:22
不需要知道上清的总量，比如你乙腈加入的是3mL，你上清可以就取2.5上清就好了，吹干，复溶，进样。提取回收率在液相里就是用处理后得到的峰面积比上标液的峰面积，就行了。
比如空白血浆100uL，加入标液50uL，那这就相当于标液被稀释了2倍。算提取回收率的时候你处理后得到的峰面积要乘以2之后再闭上标液的峰面积。
赞一下 回复此楼
2楼2012-06-14 09:15:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

qazw

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by liuyuanzuo at 2012-06-14 09:15:39
不需要知道上清的总量，比如你乙腈加入的是3mL，你上清可以就取2.5上清就好了，吹干，复溶，进样。提取回收率在液相里就是用处理后得到的峰面积比上标液的峰面积，就行了。
比如空白血浆100uL，加入标液50uL，那这 ...

“提取回收率在液相里就是用处理后得到的峰面积比上标液的峰面积”，但是，我加入3ml乙腈，取出2.5ml上清的话，这2.5ml上清液中只含部分药物，况且乙腈溶于水，我的上清液体积也不是3ml吧。也就是说如果我上清液取2ml跟取2.5ml，那么吹干之后复溶进样的到的峰面积跟标液比的话，会有两个不同的结果，会吗？
赞一下 回复此楼
3楼2012-06-14 14:34:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

qazw

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by liuyuanzuo at 2012-06-14 09:15:39
不需要知道上清的总量，比如你乙腈加入的是3mL，你上清可以就取2.5上清就好了，吹干，复溶，进样。提取回收率在液相里就是用处理后得到的峰面积比上标液的峰面积，就行了。
比如空白血浆100uL，加入标液50uL，那这 ...

“比如空白血浆100uL，加入标液50uL，那这就相当于标液被稀释了2倍。算提取回收率的时候你处理后得到的峰面积要乘以2之后再闭上标液的峰面积。”这样应该不太对吧，我上清取2ml和取2.5ml最后都要和标液比较。那么回收率不就不一样了？
赞一下 回复此楼
4楼2012-06-14 14:39:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

liuyuanzuo

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
中药2000: 金币+1, 谢谢 2012-06-14 22:27:52
引用回帖:
4楼: Originally posted by qazw at 2012-06-14 14:39:15
“比如空白血浆100uL，加入标液50uL，那这就相当于标液被稀释了2倍。算提取回收率的时候你处理后得到的峰面积要乘以2之后再闭上标液的峰面积。”这样应该不太对吧，我上清取2ml和取2.5ml最后都要和标液比较。那么回 ...

上清你要尽量全取上来，基本3mL的话取2.5mL，如果取2mL的话，你没取上来的0.5mL也算是提取损失的那一部分，明白？比如2.5mL提取回收率为66.可能2mL就是62%。
赞一下(1人) 回复此楼
5楼2012-06-14 15:02:07
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

kkbyb

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
中药2000: 金币+1, 谢谢 2012-06-14 22:27:36
神啊，跟你取多少上清液没关系，你那个内标不就是干这个使的嘛。内标法与进样量无关，同理推及与取样量无关。

再说你标液取2.5mL你样品就取2.5，你标液取2mL你样品就取2，干嘛非弄个不平行操作啊
赞一下 回复此楼
6楼2012-06-14 15:02:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

qazw

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
6楼: Originally posted by kkbyb at 2012-06-14 15:02:49
神啊，跟你取多少上清液没关系，你那个内标不就是干这个使的嘛。内标法与进样量无关，同理推及与取样量无关。

再说你标液取2.5mL你样品就取2.5，你标液取2mL你样品就取2，干嘛非弄个不平行操作啊

你没明白我的意思吧，标准溶液量应该是一定的。我取10ul的标准溶液配成模拟生物样品，然后以乙腈沉淀蛋白处理，最后取出一定量的上清液进样，那么回收率怎么算呢？绝对回收率是要峰面积进行比较的，而不是把内标牵涉进来的，我标准溶液进样出来的峰面积肯定是一定的（也就是分母），那么模拟生物样品上清总量未知的话我怎么知道提取出来了多少量，又如何去确定回收率呢？
赞一下 回复此楼
7楼2012-06-14 20:42:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hd1204

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
7楼: Originally posted by qazw at 2012-06-14 20:42:56
你没明白我的意思吧，标准溶液量应该是一定的。我取10ul的标准溶液配成模拟生物样品，然后以乙腈沉淀蛋白处理，最后取出一定量的上清液进样，那么回收率怎么算呢？绝对回收率是要峰面积进行比较的，而不是把内标牵 ...

你可以把内标的峰面积带进去算  ~~一定要确定每次取得上清液的体积，平行操作。
赞一下 回复此楼
8楼2012-08-26 17:03:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

梨花雪、芬

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by liuyuanzuo at 2012-06-14 09:15:39
不需要知道上清的总量，比如你乙腈加入的是3mL，你上清可以就取2.5上清就好了，吹干，复溶，进样。提取回收率在液相里就是用处理后得到的峰面积比上标液的峰面积，就行了。
比如空白血浆100uL，加入标液50uL，那这 ...

应该被稀释了3倍吧

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
9楼2018-05-21 08:27:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Matt Luo

新虫 (正式写手)
多看看文献资料。你加入体积都不对，500微升血浆用500微升乙腈沉淀不够。

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
10楼2018-05-22 07:04:07
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 学员v2d8Cv 的主题更新
101/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭