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qazw

新虫 (初入文坛)

[求助] 生物样品前处理问题

最近做药动，对于样品前处理的沉淀蛋白法不太理解。用与水项混溶的有机溶剂沉淀蛋白时，比如说用乙腈，我取500ul血浆，加入500ul乙腈，涡旋离心后要取上清进样，但是上清的总体积我不知道，取一定量上清进样的话，提取回收率该怎么算呢？上清液的总体积用不用知道呢？请高手指点迷津。
例：取肝素抗凝血浆600uL，置10mL具塞离心试管中，依次加入内标溶液50ul和乙腈3mL，涡旋混合，离心，分取上清，于40℃氮气流下吹干，残渣加入流动相80ul，涡旋，高速
离心(16000rpm/min)10min，取上清液20uL，注入高效液相色谱仪。
这个过程中“分取上清”是把上清液完全取出吗？并且要确定总的上清量吗？如果不是的话，那提取回收率该怎么算呢？
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1楼 2012-06-13 23:21:25
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hd1204

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
7楼: Originally posted by qazw at 2012-06-14 20:42:56
你没明白我的意思吧，标准溶液量应该是一定的。我取10ul的标准溶液配成模拟生物样品，然后以乙腈沉淀蛋白处理，最后取出一定量的上清液进样，那么回收率怎么算呢？绝对回收率是要峰面积进行比较的，而不是把内标牵 ...

你可以把内标的峰面积带进去算  ~~一定要确定每次取得上清液的体积，平行操作。
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8楼2012-08-26 17:03:45
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liuyuanzuo

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
中药2000: 金币+1, 谢谢 2012-06-14 22:27:22
不需要知道上清的总量，比如你乙腈加入的是3mL，你上清可以就取2.5上清就好了，吹干，复溶，进样。提取回收率在液相里就是用处理后得到的峰面积比上标液的峰面积，就行了。
比如空白血浆100uL，加入标液50uL，那这就相当于标液被稀释了2倍。算提取回收率的时候你处理后得到的峰面积要乘以2之后再闭上标液的峰面积。
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2楼2012-06-14 09:15:39
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qazw

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by liuyuanzuo at 2012-06-14 09:15:39
不需要知道上清的总量，比如你乙腈加入的是3mL，你上清可以就取2.5上清就好了，吹干，复溶，进样。提取回收率在液相里就是用处理后得到的峰面积比上标液的峰面积，就行了。
比如空白血浆100uL，加入标液50uL，那这 ...

“提取回收率在液相里就是用处理后得到的峰面积比上标液的峰面积”，但是，我加入3ml乙腈，取出2.5ml上清的话，这2.5ml上清液中只含部分药物，况且乙腈溶于水，我的上清液体积也不是3ml吧。也就是说如果我上清液取2ml跟取2.5ml，那么吹干之后复溶进样的到的峰面积跟标液比的话，会有两个不同的结果，会吗？
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3楼2012-06-14 14:34:22
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qazw

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by liuyuanzuo at 2012-06-14 09:15:39
不需要知道上清的总量，比如你乙腈加入的是3mL，你上清可以就取2.5上清就好了，吹干，复溶，进样。提取回收率在液相里就是用处理后得到的峰面积比上标液的峰面积，就行了。
比如空白血浆100uL，加入标液50uL，那这 ...

“比如空白血浆100uL，加入标液50uL，那这就相当于标液被稀释了2倍。算提取回收率的时候你处理后得到的峰面积要乘以2之后再闭上标液的峰面积。”这样应该不太对吧，我上清取2ml和取2.5ml最后都要和标液比较。那么回收率不就不一样了？
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4楼2012-06-14 14:39:15
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