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wmy110430

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[求助] LC-MS-MS如何用内内标定量分析？

本人现在用三重四级杆LCMSMS定量分析目标物，但是没有标准品。老师让用内标法进行相对定量，内标物已选好，老师只说要我保证在前处理后、进样测试前，在待测样品中加入定量的内标物，然后进行测试。剩下的我就不太明白定量分析时，内标法该具体怎么操作呢？
看资料说用内标法做色话定量分析时，先配制一定重量比的待测组分和内标样品的混合物做色谱分析，测量峰面积，做重量比和面积比的关系曲线，此曲线即为标准曲线，如果这样的话，没有标准品怎么办啊？？？？
本人是菜鸟，不明白，麻烦各位大侠啦，求解答，万分感谢！

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1楼2013-07-10 21:38:28

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wmy110430

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wmy110430: 回帖置顶 2013-07-14 22:19:49

引用回帖:

2楼: Originally posted by 21ty at 2013-07-11 09:35:25
1、内标法进行定量分析，同样需要待测物标准品，这一点文献讲述的与你的理解都是正确的。如果没有待测物标准品就不能准确测量其含量，因为无法绘制标准曲线。
2、没有待测物标准品不能准确测量其含量，但可以通过加 ...

谢谢你的回答。我现在没有标准品，就只用面积相对定量。然后我选用LCMSMS的SIM模式（我的样品杂质比较少，选择同位素丰度为100%的分子量，上下增减0.2 老师让我这么做）。我考察因素导致的量的改变比较微量，选择一种物质为回收率指示物（反应液前处理前加入），
一种物质为内标物（老师要我保证在前处理后、液相小瓶中进样测试前，在待测样品中加入定量的内标物，然后进行测试）。

对内标那个步骤，我还是不太明白，老师让在处理完的样品进仪器前，统一加入一定质量的内标物，资料说必须还要保证内标响应跟待测目标物差不多，在一个数量级内，所以要通过计算得出内标加入量，这些到底怎么计算的呢？？？？有师兄说老师可能是让我用内标物起到定待测液体积的作用，不知道理解的对不对耶？？？。。。我又说了一大通，麻烦大侠指教了，O(∩_∩)O谢谢啦

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5楼2013-07-14 22:16:45

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21ty

铁虫 (初入文坛)

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【答案】应助回帖

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感谢参与，应助指数 +1
wmy110430: 金币+20, 谢谢你哦 2013-07-14 21:45:41

1、内标法进行定量分析，同样需要待测物标准品，这一点文献讲述的与你的理解都是正确的。如果没有待测物标准品就不能准确测量其含量，因为无法绘制标准曲线。
2、没有待测物标准品不能准确测量其含量，但可以通过加入内标的方法测量待测物的相对含量，可以比较待测物在各样品中的多少及相差倍数。你们老师可能要得到的是这个结果。
3、用lc-ms-ms做定量一般都采用MRM的扫描方式，你没有待测物标准品，就无法建立和优化MRM扫描的质谱参数，这样你只能使用FULL SCAN或SIM的扫描方法。没有待测物标准品，你也无法准确得到待测物在LC上的保留时间，如果你的样品中有与待测物相似质量数的化合物，你得到的色谱峰就不会很纯净，会对你判定那个是你的待测化合物产生干扰。

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2楼2013-07-11 09:35:25

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