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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 化学化工区 » 分析 » 质谱分析 » 求助LC-MS-MS定量问题
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soso_210

新虫 (初入文坛)

[求助] 求助LC-MS-MS定量问题

LC-MS-MS如何进行定量分析？
我想用LC-Q-TOF-MS 来做代谢组学，因为是样品是体液含有多种化合物，想加入内标后先进行一个相对的定量来判断含量发生变化的化合物。所以问题就是怎样去定量，用总离子流图好像不合适，因为每个峰对应着很多碎片离子，对单个碎片离子进行选择粒子流图积分时，峰面积明显有变化（比如说在总TIC图中是一个很小的峰，选择这个峰对应的某个荷质比进行选择粒子流图积分时峰明显变高），我想问如果利用峰面积进行相对定量的话，应该用哪个图比较合适？
我听我们管仪器的老师说的意思好像是要用二级质谱图来进行定量，而且定量时要选择这个物质的特征峰来进行定量
还有一个问题就是定性的问题，必须得用标准品才能定性吗？
在理想条件下，如果物质分的特别开的话，总离子流图的每个峰是不是代表一种物质吗？这个峰对应的碎片是不是，这个物质被打成的碎片。
哎呀，好多问题啊，我一直对也只定量定性不明白，因为我看文献中液质就跑出几个峰，为什么会检测到几十种物质，不明白，麻烦各位大侠啦，求解答，万分感谢！
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1楼 2012-08-10 17:35:47
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lzjessie_wlf

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
soundhorizo: 金币+5, 感谢您认真应助 ^^ 2012-08-10 19:58:26
soundhorizo: ACI+1 2012-08-13 21:20:40
LCMS 定量分析使用SIM 或MRM模式。公认的MRM更为准确。SIM使用Q选择性的滤过选中的分子量。但是分子量相同的化合物很多，所以，如果样品稍微复杂的话，SIM基本不合适。

MRM选择母离子和子离子。使用Q过滤母离子，q 轰击母离子，TOF过滤子离子，使子离子被检测器检测到。分子量相同，轰击后产生的子离子不一样的干扰离子就被排除了。所以，MRM模式是更为可靠的LC-MS定量分析方法。MRM检测是离子对。

内标的选择原理是结构基本和待测化合物类似。结构相同或类似，主要是为了满足被离子化的效率与样品类似。这就是为什么很多都选择使用该化合物或此类化合物的氘代试剂。化合物的分子量与待测物质不重合(还需要尽量避开化合物的isotopic peak的m/z)，基本可以和待测物质分开。

如果使用MRM, 样品被分开的话，那么理论上来说总离子流图上的每个峰都是代表一种物质。同时使用MRM模式，如果样品们的分子量与子离子不重叠，那么，即使在柱子中不被分开的化合物，也是可以认为在MS中被分开了。

文献报道的液质中几个峰，MRM检测到几十个物质就是多个物质在同一时间从色谱柱跑出来了。虽然出峰时间一样，但是每个化合物的peak应该是软件中可以显示出来的，只不过报道中由于篇幅有限，会被简略掉。

定性的话，需要标品，retention time 需要一致。
定量的话，需要先作标准曲线。peak area ration vs concentration.

LC-MS 方法的设立说简单也简单，说难也难。
具体project具体分析。
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2楼2012-08-10 18:43:01
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lzjessie_wlf

金虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by lzjessie_wlf at 2012-08-10 18:43:01
LCMS 定量分析使用SIM 或MRM模式。公认的MRM更为准确。SIM使用Q选择性的滤过选中的分子量。但是分子量相同的化合物很多，所以，如果样品稍微复杂的话，SIM基本不合适。

MRM选择母离子和子离子。使用Q过滤母离子， ...

校正

内标的选择原理是结构基本和待测化合物类似。结构相同或类似，主要是为了其满足被离子化的效率与样品类似。这就是为什么很多内标都选择该化合物或此类化合物的氘代化合物。内标的选择还要求其分子量与待测物质不重合(还需要尽量避开化合物的isotopic peak的m/z)，并且可以和待测物质分开。
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3楼2012-08-10 18:48:41
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wy511813

银虫 (小有名气)
★
xbqewpq: 金币+1, 感谢应助，欢迎常来分析版交流 ^ ^ 2012-08-13 14:17:26
你解决定量问题，用三重四级杆最合适吧。Q-TOF在定性方面更强大一些。先用标品把色谱质谱条件摸索好了，再做加样回收。
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开心每一天
4楼2012-08-13 11:45:01
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soso_210

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by lzjessie_wlf at 2012-08-10 18:43:01
LCMS 定量分析使用SIM 或MRM模式。公认的MRM更为准确。SIM使用Q选择性的滤过选中的分子量。但是分子量相同的化合物很多，所以，如果样品稍微复杂的话，SIM基本不合适。

MRM选择母离子和子离子。使用Q过滤母离子， ...

你好，万分感谢您的解惑，我还想问一个问题：如果进行MRM模式检测，是不是也得事先知道你所检测的化合物的分子量这些信息啊？怎么确定这些离子对呢？原谅我吧，我真是菜鸟，我们实验室没人做这个，我是学生物的对这些真头疼啊，有没有系统的书让我了解一下，谢谢啦，万分感谢
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5楼2012-08-13 14:08:57
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lzjessie_wlf

金虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by soso_210 at 2012-08-13 14:08:57
你好，万分感谢您的解惑，我还想问一个问题：如果进行MRM模式检测，是不是也得事先知道你所检测的化合物的分子量这些信息啊？怎么确定这些离子对呢？原谅我吧，我真是菜鸟，我们实验室没人做这个，我是学生物的对这 ...

所检测的化合物的分子量大致可以由MS scan得到，然后对你感兴趣的峰逐个做tandom MS, 确定离子对。
  做这些都是使用直接进样就可以得到这些信息。

对于你想做的"样品是体液含有多种化合物"，个人认为最好先查阅相关文献。了解这种体液中有什么化合物。然后，再具体的碰到问题具体分析。
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6楼2012-08-13 20:58:39
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lzjessie_wlf

金虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by soso_210 at 2012-08-13 14:08:57
你好，万分感谢您的解惑，我还想问一个问题：如果进行MRM模式检测，是不是也得事先知道你所检测的化合物的分子量这些信息啊？怎么确定这些离子对呢？原谅我吧，我真是菜鸟，我们实验室没人做这个，我是学生物的对这 ...

对于 MS方面的资料可以使用wikipedia看看其基本原理。
   还有就是看你们MS机器的操作手册。碰到具体不理解的概念问题。可以上来提问。
    至于怎么做“体液含有多种化合物”， 有一本“Sample Preparation in Biological
Mass Spectrometry”。
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7楼2012-08-13 21:08:32
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shancha

新虫 (初入文坛)
对于代谢组学，如果是非靶向的，用MASSHUNTER进行处理
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8楼2012-10-15 22:01:25
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zhuman1993

铜虫 (初入文坛)
内容已删除
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9楼2015-06-30 19:46:53
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莫小霞

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by lzjessie_wlf at 2012-08-10 18:43:01
LCMS 定量分析使用SIM 或MRM模式。公认的MRM更为准确。SIM使用Q选择性的滤过选中的分子量。但是分子量相同的化合物很多，所以，如果样品稍微复杂的话，SIM基本不合适。

MRM选择母离子和子离子。使用Q过滤母离子， ...

问一下您：就是定性离子和定量离子 子离子 母离子 定性离子对和定量离子对 我搞不清
1.按理说 用质谱扫描 找出母离子(有一个) 对其轰击 再从破碎的子离子(有两个)片中选出比较理想的(一个)来作为定性离子
2. 但是有的文章就会出现定性离子对和定量离子对(看了好多 我大概可以理解为子离子中被选为定量离子的就和母离子作为离子对 被选为定性离子的会和母离子作为定性离子对)
3. 但是！有篇文章中的子离子竟然两个都是定量离子？为什么？如果说两个都是定量离子的话 那么定性离子呢？质谱本身最适合做的就是定性啊？
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10楼2018-12-19 17:26:24
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