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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 化学化工区 » 分析 » 色谱质谱 » 【讨论】LC-MS/MS的问题 很多人都能碰到
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changhailin

新虫 (初入文坛)

[交流] 【讨论】LC-MS/MS的问题 很多人都能碰到

本人刚做LC-MS/MS 有几个问题想和大家讨论一下，我所用的是 三重四级杆，定量牛就不用了。 关于总离子流图的 问题，想咨询下大家，
问题（1）我感觉似乎总离子流图没什么多大的用处，主不过是用来找到母离子罢了，TIC峰型的好坏 对定量有影响吗？感觉经过MS1 2的SIM 别的离子也不会造成多大的影响吧，可能会有些MATRIX EFFECT。 必须调整条件得到峰型比较好的TIC吗？
（2) 我想 同时测定个 物质A和B，A的是 极性大的 流动相为C ; D 20:80 B是极性小的 流动相为C ： D 80:20 我怎么 来选择一个合适的流动相比例从而更好的定量呢，这似乎有和第一个问题相关，如果 TIC没什么用的话 流动相选择偏中间的比例 如C ：D 50;50 ，利用MS的 SIM 功能，即使LC 分开的不是很好，对定量也没有什么太大的影响。 不知道这样做行不行，有前辈 高人指点一下吗。
这个问题相信困扰着很多人 ，重赏 谢谢
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1楼2010-11-22 19:54:30
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笑盲虫

木虫 (著名写手)
碰到过和楼主类似的问题   uv下峰相应很大，但将同样的方法嫁接到ms上，在tic上就没有图。
首先，在uv上我们加酸或者碱，以及离子对试剂，是为了保证待分离组分在色谱柱中尽可能以游离态存在，而保证较好的峰形或者较好的分离度。
其次在质谱中，调酸或者调碱，是为了保证待测组分在离子源中具有好的离子化效果。
结合以上两种分析，在uv上分离和检测相应很好的组分，往往在ms上看不到，或者只有微弱的tic响应，原因在于待测化合物在色谱中主要以游离态存在，进行离子化过程中，其离子化效率受到了抑制。
对于该问题怎么来解决呢   
首先，在不接色谱柱的情况下，通过两通直接进样，去摸索待测组分的最佳离子化条件。比对该离子化条件与色谱中调酸调碱中的区别，如果差别比较大，最后进行柱后离子化条件衍生过程。实验看看效果如何。
其次，接上色谱柱，进样品看色谱分离和ms检测，又没有改善，如果没有改善，该考虑ms的离子源是否干净，已经毛细管是否需要进行清洗，如果有改善，在需要对上述优化的条件进行微调，知道得到最佳的分离条件以及最佳的ms结果为止。
很多虫虫都认为色谱方法可以直接移植到ms上，其实存在这样的误区。
希望对你有帮助
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17楼2013-05-10 09:09:01
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changhailin

新虫 (初入文坛)

期待

期待高人
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2楼2010-11-22 20:41:25
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wangyudong

金虫 (小有名气)
changhailin(金币+1): 2010-11-22 22:11:44
关于第二个问题：用的不是梯度流动相吗？
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3楼2010-11-22 20:58:27
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changhailin

新虫 (初入文坛)

谢谢

比如这个梯度一般多怎么设呢
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4楼2010-11-22 22:12:28
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changchuan

新虫 (初入文坛)
changhailin(金币+1): 2010-11-24 08:37:42
反向色谱的话，流动相中，有机相的比例越多，出峰时间就越短，所以你可以根据你现有的两个条件来综合考虑，而且梯度淋洗的条件是要多次摸索的，不能操之过急。
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5楼2010-11-23 16:16:02
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changchuan

新虫 (初入文坛)
changhailin(金币+1): 2010-11-24 08:37:47
至于TIC，是有用的，它首先可以反映你的仪器的状况，如果它总体趋势是平稳的，这样仪器才算稳定，忽上忽下就不好了，表明仪器检测到的离子流忽强忽弱，那么可能是离子源那里电离不好等等，会影响检测的，比如本可以检测到的却检测不到。其次TIC中出的峰和LC出的峰应该是一一对应的，如果LC出峰而TIC没有，可能是电离不好，比如电离模式没有选对，或者离子源不合适。总之TIC是有用的
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6楼2010-11-23 16:20:27
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zhengxim

木虫 (正式写手)
changhailin(金币+1): 2010-11-24 08:37:51
引用回帖:
Originally posted by changhailin at 2010-11-22 19:54:30:
本人刚做LC-MS/MS 有几个问题想和大家讨论一下，我所用的是 三重四级杆，定量牛就不用了。 关于总离子流图的 问题，想咨询下大家，
问题（1）我感觉似乎总离子流图没什么多大的用处，主不过是用来找到母离子罢了 ...

定量的确是根据SIM，但TIC可以看出整体的情况，在哪里可能有杂质，如果你的杂质与样品位置很近，用TIC可以看出这些信息
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7楼2010-11-24 08:10:48
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changhailin

新虫 (初入文坛)

。

引用回帖:
Originally posted by changchuan at 2010-11-23 16:20:27:
至于TIC，是有用的，它首先可以反映你的仪器的状况，如果它总体趋势是平稳的，这样仪器才算稳定，忽上忽下就不好了，表明仪器检测到的离子流忽强忽弱，那么可能是离子源那里电离不好等等，会影响检测的，比如本可 ...

我现在测得一物质很纯  但是峰型有点拖尾，从2级质谱上来看，虽然TIC的峰型不是很好，但是都是很纯的一种物质，这是没分开，还是怎么回事？
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8楼2010-11-24 08:39:54
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changhailin

新虫 (初入文坛)

。

引用回帖:
Originally posted by zhengxim at 2010-11-24 08:10:48:

定量的确是根据SIM，但TIC可以看出整体的情况，在哪里可能有杂质，如果你的杂质与样品位置很近，用TIC可以看出这些信息

我现在测得一物质很纯  但是峰型有点拖尾，从2级质谱上来看，虽然TIC的峰型不是很好，但是都是很纯的一种物质，这是没分开，还是怎么回事？
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9楼2010-11-24 08:40:12
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changchuan

新虫 (初入文坛)
changhailin(金币+1): 2010-11-24 11:02:18
changhailin(金币+1): 2010-11-24 16:48:27
你说的峰形不好是TIC峰形不好吗？还是色谱的峰形不好？我没有做过定量，但是TIC得峰形一直是不规则的吧，本来就很难让它像色谱那样出对称性好的峰。如果你想它更好一点，可是试试换换参数进行优化，就像解决色谱拖尾峰那样去优化条件。另外想知道它是不是纯物质最简单就是做色谱，只出一个峰就是了
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10楼2010-11-24 08:51:04
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changhailin

新虫 (初入文坛)

谢谢

引用回帖:
Originally posted by changchuan at 2010-11-24 08:51:04:
你说的峰形不好是TIC峰形不好吗？还是色谱的峰形不好？我没有做过定量，但是TIC得峰形一直是不规则的吧，本来就很难让它像色谱那样出对称性好的峰。如果你想它更好一点，可是试试换换参数进行优化，就像解决色谱拖 ...

我测得物质  色谱峰很好 但是为什么TIC 峰型不是很好呢，按道理说  一样的流动相，色谱峰峰也同样是根据相应强度得来的，TIC也是根据响应强度得来的，色谱峰好的话，TIC的峰型也一样哈，只不过检测器不同而已，谢谢
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11楼2010-11-24 11:04:28
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changhailin

新虫 (初入文坛)

1

引用回帖:
Originally posted by changchuan at 2010-11-24 08:51:04:
你说的峰形不好是TIC峰形不好吗？还是色谱的峰形不好？我没有做过定量，但是TIC得峰形一直是不规则的吧，本来就很难让它像色谱那样出对称性好的峰。如果你想它更好一点，可是试试换换参数进行优化，就像解决色谱拖 ...

色谱峰就一个，峰型很好，但是为什么用LC-MS测得TIC峰型就不好呢，都是根据响应值的高低，只不过是检测器不同罢了，按道理说根据相应强度色谱峰对应的就是TIC哈，同样的流动相，为什么峰型不一样呢，谢谢
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12楼2010-11-24 11:15:40
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changchuan

新虫 (初入文坛)
changhailin(金币+1): 2010-11-24 16:56:06
就我目前做液质的经验看，TIC的峰形本来就很难像液相那样对称的，因为液相是检测光吸收，而TIC是离子流，离子流不会总是很稳定很均匀的，自然峰形不好，而且一个和液相对应的TIC峰里面本来就包含若干个小的小峰（就是一个小尖），每个小峰是一次扫描电压的循环。只要你扣除背景后选择TIC峰得到的质谱图是你所要的分子量就可以了
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13楼2010-11-24 13:11:35
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changhailin

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
Originally posted by changchuan at 2010-11-24 13:11:35:
就我目前做液质的经验看，TIC的峰形本来就很难像液相那样对称的，因为液相是检测光吸收，而TIC是离子流，离子流不会总是很稳定很均匀的，自然峰形不好，而且一个和液相对应的TIC峰里面本来就包含若干个小的小峰（ ...

谢谢，现在是这种情况呢，以前的主峰旁边有个很明显的肩膀，我改变流动相后 2个峰合到一起了，这是不是就说明 我改变后的流动相，更适合我要测的东西呢？
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14楼2010-11-24 16:56:00
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changchuan

新虫 (初入文坛)
changhailin(金币+1): 2010-11-24 17:27:18
如果你的液相只有一个峰的话，那基本是没问题的，因为有物质才有吸收，而对于质谱，不管是溶剂还是仪器本身，都会带来杂质，所以不太好用它来判断样品是不是纯，TIC的峰只代表总离子强度，有两个峰只说明它在两个时间里检测到更多的离子而已，不说明是两个物质，除非这两个峰对应的液相也有两个峰。TIC有尖峰是正常的，有时还会出现特别宽的峰的情况。液质联用的话，流动相的选择和比例确实对电离情况有影响
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15楼2010-11-24 17:24:33
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平平2010

铜虫 (初入文坛)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
纯物质也不一定能出来很好很对称的峰形，这有可能是你的色谱条件没设好，流动相PH设计不合理，使待测物未能得到很好的分离，造成拖尾，或者你使用的是未封端或未完全封端的柱子，使待测物与硅醇基反应拖尾，另外看看仪器是不是稳定。
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16楼2012-02-20 20:27:58
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smart_phenol

银虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
关于TIC峰，液相峰，二级质谱峰的问题16楼说的好精彩啊，受教。
关于是否要梯度洗脱的问题，我认为最好是设置梯度洗脱。
首先，重叠在一起的峰虽然可以通过质谱区分开来，但浓度大的时候可能会产生离子抑制等可能。
其次，梯度洗脱可以排除杂质的干扰，尤其在基体比较复杂的时候。
而且，梯度洗脱可以在程序中设置一定的柱子冲洗时间，延长柱子寿命。
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18楼2014-09-04 15:46:52
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