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水瓶座薰薰

铁虫 (初入文坛)

[求助] SRAP分析中PCR出现的问题已有2人参与

正在应用SRAP技术分析遗传多样性,前期的引物筛选过程很顺利,部分电泳图如图一所示;但是在没改变任何实验条件的情况下突然出现了没有条带的情况,如图SRAP分析中PCR出现的问题SRAP分析中PCR出现的问题-1,现在尝试过换用没有反复冻融的引物、样品,温度梯度实验,换用PCR仪,除marker外还是没有条带,所用的RCR体系为25微升,MIX0.5μ,样品1μ,正反引物各0.5μ,水10.5μ。

    想请教各位有经验的师兄师姐帮忙分析下原因可能出现在什么地方,电泳没条带的状况以及持续了一个月,真的很着急啊!

SRAP分析中PCR出现的问题-2


SRAP分析中PCR出现的问题-3
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勇敢的人们,向前冲吧!
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水瓶座薰薰

铁虫 (初入文坛)

没人回复,只好自己顶一下啦,有没有了解SRAP技术的大侠帮帮我呢
勇敢的人们,向前冲吧!
2楼2015-05-11 20:04:39
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济云帆

新虫 (初入文坛)

你好,我想问问你现在做的怎么样了,我现在也做得这个。但是条带有时候有,有时候没有。而且浓度低。我想问一下你们PCR的体系是怎样的呢
3楼2015-05-29 08:57:43
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18761615793

木虫 (正式写手)

小虫

【答案】应助回帖

看图感觉是模板的问题啊,都在孔下面一点点距离处就不跑了?
todayisdifficult,tomorrowismoredifficult,butthedayaftertomorrowisbeautiful
4楼2015-05-29 09:11:36
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Alisa hui

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

我也是在做这个,老是反反复复的,你的还好,我的复筛两天就就这样,往下进行不了,有没有人能帮忙解释一下,我也用的25微升的体系,MIX12.5微升,其余的量跟楼主的一样
5楼2015-07-06 17:01:23
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Alisa hui

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

引用回帖:
5楼: Originally posted by Alisa   hui at 2015-07-06 17:01:23
我也是在做这个,老是反反复复的,你的还好,我的复筛两天就就这样,往下进行不了,有没有人能帮忙解释一下,我也用的25微升的体系,MIX12.5微升,其余的量跟楼主的一样

我也是在做这个,老是反反复复的,你的还好,我的复筛两天就就这样,往下进行不了,有没有人能帮忙解释一下,我也用的25微升的体系,MIX12.5微升,其余的量跟楼主的一样 ,有没大神指教一下,我出现这样的情况是为什么,刚做的两天好好的,该试的都试过了,还是没找出来原因,DNA 也换过了,引物也是新和成的,循环数也减少到32个循环了,还是找不出来原因
SRAP分析中PCR出现的问题-4
89B86A4B3F9478A6D5B0D744A791711F.jpg

6楼2015-07-06 17:13:39
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济云帆

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
6楼: Originally posted by Alisa   hui at 2015-07-06 17:13:39
我也是在做这个,老是反反复复的,你的还好,我的复筛两天就就这样,往下进行不了,有没有人能帮忙解释一下,我也用的25微升的体系,MIX12.5微升,其余的量跟楼主的一样 ,有没大神指教一下,我出现这样的情况是为 ...

你好,请问现在做的怎么样了

发自小木虫IOS客户端
7楼2016-01-06 06:29:00
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fenfen_00

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 济云帆 at 2015-05-29 08:57:43
你好,我想问问你现在做的怎么样了,我现在也做得这个。但是条带有时候有,有时候没有。而且浓度低。我想问一下你们PCR的体系是怎样的呢

你好,我也在做SRAP,没有条带情况反复了好几次了,总是不明白为什么有了 为什么没了。请问你们的情况解决了吗?麻烦指导一下。
8楼2018-03-19 09:42:50
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fenfen_00

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
5楼: Originally posted by Alisa   hui at 2015-07-06 17:01:23
我也是在做这个,老是反反复复的,你的还好,我的复筛两天就就这样,往下进行不了,有没有人能帮忙解释一下,我也用的25微升的体系,MIX12.5微升,其余的量跟楼主的一样

请问您反复的问题怎么解决的?我也遇到了同样的问题。
9楼2018-03-19 09:45:04
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fenfen_00

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
6楼: Originally posted by Alisa   hui at 2015-07-06 17:13:39
我也是在做这个,老是反反复复的,你的还好,我的复筛两天就就这样,往下进行不了,有没有人能帮忙解释一下,我也用的25微升的体系,MIX12.5微升,其余的量跟楼主的一样 ,有没大神指教一下,我出现这样的情况是为 ...

遇到了和你一模一样的情况,求指点、。
10楼2018-03-19 09:46:06
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