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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » SRAP分析中PCR出现的问题
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水瓶座薰薰

铁虫 (初入文坛)

[求助] SRAP分析中PCR出现的问题 已有2人参与

正在应用SRAP技术分析遗传多样性，前期的引物筛选过程很顺利，部分电泳图如图一所示；但是在没改变任何实验条件的情况下突然出现了没有条带的情况，如图SRAP分析中PCR出现的问题SRAP分析中PCR出现的问题-1，现在尝试过换用没有反复冻融的引物、样品，温度梯度实验，换用PCR仪，除marker外还是没有条带，所用的RCR体系为25微升，MIX0.5μ，样品1μ，正反引物各0.5μ，水10.5μ。

    想请教各位有经验的师兄师姐帮忙分析下原因可能出现在什么地方，电泳没条带的状况以及持续了一个月，真的很着急啊！

SRAP分析中PCR出现的问题-2


SRAP分析中PCR出现的问题-3
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勇敢的人们，向前冲吧！
1楼 2015-05-07 20:47:54
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水瓶座薰薰

铁虫 (初入文坛)
没人回复，只好自己顶一下啦，有没有了解SRAP技术的大侠帮帮我呢
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勇敢的人们，向前冲吧！
2楼2015-05-11 20:04:39
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济云帆

新虫 (初入文坛)
你好，我想问问你现在做的怎么样了，我现在也做得这个。但是条带有时候有，有时候没有。而且浓度低。我想问一下你们PCR的体系是怎样的呢
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3楼2015-05-29 08:57:43
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18761615793

木虫 (正式写手)

小虫

【答案】应助回帖

看图感觉是模板的问题啊，都在孔下面一点点距离处就不跑了？
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todayisdifficult，tomorrowismoredifficult，butthedayaftertomorrowisbeautiful
4楼2015-05-29 09:11:36
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Alisa hui

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

我也是在做这个，老是反反复复的，你的还好，我的复筛两天就就这样，往下进行不了，有没有人能帮忙解释一下，我也用的25微升的体系，MIX12.5微升，其余的量跟楼主的一样
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5楼2015-07-06 17:01:23
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Alisa hui

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

引用回帖:
5楼: Originally posted by Alisa   hui at 2015-07-06 17:01:23
我也是在做这个，老是反反复复的，你的还好，我的复筛两天就就这样，往下进行不了，有没有人能帮忙解释一下，我也用的25微升的体系，MIX12.5微升，其余的量跟楼主的一样

我也是在做这个，老是反反复复的，你的还好，我的复筛两天就就这样，往下进行不了，有没有人能帮忙解释一下，我也用的25微升的体系，MIX12.5微升，其余的量跟楼主的一样 ，有没大神指教一下，我出现这样的情况是为什么，刚做的两天好好的，该试的都试过了，还是没找出来原因，DNA 也换过了，引物也是新和成的，循环数也减少到32个循环了，还是找不出来原因
SRAP分析中PCR出现的问题-4
89B86A4B3F9478A6D5B0D744A791711F.jpg
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6楼2015-07-06 17:13:39
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济云帆

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
6楼: Originally posted by Alisa   hui at 2015-07-06 17:13:39
我也是在做这个，老是反反复复的，你的还好，我的复筛两天就就这样，往下进行不了，有没有人能帮忙解释一下，我也用的25微升的体系，MIX12.5微升，其余的量跟楼主的一样 ，有没大神指教一下，我出现这样的情况是为 ...

你好，请问现在做的怎么样了

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7楼2016-01-06 06:29:00
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fenfen_00

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 济云帆 at 2015-05-29 08:57:43
你好，我想问问你现在做的怎么样了，我现在也做得这个。但是条带有时候有，有时候没有。而且浓度低。我想问一下你们PCR的体系是怎样的呢

你好，我也在做SRAP，没有条带情况反复了好几次了，总是不明白为什么有了 为什么没了。请问你们的情况解决了吗？麻烦指导一下。
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8楼2018-03-19 09:42:50
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fenfen_00

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
5楼: Originally posted by Alisa   hui at 2015-07-06 17:01:23
我也是在做这个，老是反反复复的，你的还好，我的复筛两天就就这样，往下进行不了，有没有人能帮忙解释一下，我也用的25微升的体系，MIX12.5微升，其余的量跟楼主的一样

请问您反复的问题怎么解决的？我也遇到了同样的问题。
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9楼2018-03-19 09:45:04
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fenfen_00

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
6楼: Originally posted by Alisa   hui at 2015-07-06 17:13:39
我也是在做这个，老是反反复复的，你的还好，我的复筛两天就就这样，往下进行不了，有没有人能帮忙解释一下，我也用的25微升的体系，MIX12.5微升，其余的量跟楼主的一样 ，有没大神指教一下，我出现这样的情况是为 ...

遇到了和你一模一样的情况，求指点、。
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10楼2018-03-19 09:46:06
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