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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 链霉菌DNA提取
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xh446063

新虫 (小有名气)

[求助] 链霉菌DNA提取 已有4人参与

最近一直在做链霉菌总DNA的提取，选用天根的细菌DNA提取试剂盒，但是尝试了多次都没有成功。我用的是20mg/mL 的溶菌酶37℃，水浴3h甚至更长时间，后续操作按照试剂盒说明书进行，但是都没有提出来。是不是溶菌酶处理不彻底，大家都用多大浓度的溶菌酶作用多长时间？是否有更好的方法能推荐一下。恳请赐教！！
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1楼 2015-05-07 19:25:13
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xh446063

新虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by syn1985 at 2015-05-12 10:47:03
链霉菌基因组你提取的时候用个小勺子挖一点溶菌酶扔进去就可以了，浓度可以大一些，37度放30-60min后加10%SDS 放37度30min后再加CTAB提取液就全裂解开了，很好用的，我提过好几株链霉菌基因组都可以的，不要用试剂盒 ...

谢谢你的回复，我改用氯仿苯酚抽提的方法提出来了
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15671627439
9楼2015-05-24 16:57:44
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yc652090251

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
可以先用液氮将菌体研磨一下，然后在提。
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低调做人好么~~
2楼2015-05-08 10:06:39
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xh446063

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by yc652090251 at 2015-05-08 10:06:39
可以先用液氮将菌体研磨一下，然后在提。

我尝试过用玻璃匀浆管研磨菌体，但是提出来的DNA都降解了，琼脂糖电泳整个泳道都是亮的。
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3楼2015-05-11 12:31:39
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yc652090251

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
xh446063: 金币+3, ★★★很有帮助 2015-05-24 16:54:38
引用回帖:
3楼: Originally posted by xh446063 at 2015-05-11 12:31:39
我尝试过用玻璃匀浆管研磨菌体，但是提出来的DNA都降解了，琼脂糖电泳整个泳道都是亮的。...

溶菌酶作用一般30-60min，因为不知道你的具体实验方法，你好好检查一下你的操作步骤，看看哪一步可能对dna产生讲解作用，我提的时候一般不会有降解现象出现的。你可以不用试剂盒提取试试。方法很多地方都有介绍的，只要按部就班的去弄，不会出问题的。
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低调做人好么~~
4楼2015-05-11 14:43:02
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