24小时热门版块排行榜    

查看: 2251  |  回复: 12

xh446063

新虫 (小有名气)

[求助] 链霉菌DNA提取 已有4人参与

最近一直在做链霉菌总DNA的提取,选用天根的细菌DNA提取试剂盒,但是尝试了多次都没有成功。我用的是20mg/mL 的溶菌酶37℃,水浴3h甚至更长时间,后续操作按照试剂盒说明书进行,但是都没有提出来。是不是溶菌酶处理不彻底,大家都用多大浓度的溶菌酶作用多长时间?是否有更好的方法能推荐一下。恳请赐教!!
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yc652090251

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
可以先用液氮将菌体研磨一下,然后在提。
低调做人好么~~
2楼2015-05-08 10:06:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xh446063

新虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by yc652090251 at 2015-05-08 10:06:39
可以先用液氮将菌体研磨一下,然后在提。

我尝试过用玻璃匀浆管研磨菌体,但是提出来的DNA都降解了,琼脂糖电泳整个泳道都是亮的。
3楼2015-05-11 12:31:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yc652090251

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
xh446063: 金币+3, ★★★很有帮助 2015-05-24 16:54:38
引用回帖:
3楼: Originally posted by xh446063 at 2015-05-11 12:31:39
我尝试过用玻璃匀浆管研磨菌体,但是提出来的DNA都降解了,琼脂糖电泳整个泳道都是亮的。...

溶菌酶作用一般30-60min,因为不知道你的具体实验方法,你好好检查一下你的操作步骤,看看哪一步可能对dna产生讲解作用,我提的时候一般不会有降解现象出现的。你可以不用试剂盒提取试试。方法很多地方都有介绍的,只要按部就班的去弄,不会出问题的。
低调做人好么~~
4楼2015-05-11 14:43:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

轩辕一剑

木虫 (小有名气)

技术员

【答案】应助回帖

可以试试索莱宝的一个土壤基因组试剂盒,非常强大的,提链霉菌的一点问题都没有

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

天道酬勤
5楼2015-05-11 18:04:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

whdxhxy

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


xh446063: 金币+1 2015-05-24 16:56:07
如果是链霉菌的话可以尝试在培养基中加甘氨酸和氯化镁,这样形成的细胞壁容易裂解,消化时间就短。

[ 发自小木虫客户端 ]
6楼2015-05-12 08:25:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

syn1985

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


xh446063: 金币+1, ★★★很有帮助 2015-05-24 16:55:56
链霉菌基因组你提取的时候用个小勺子挖一点溶菌酶扔进去就可以了,浓度可以大一些,37度放30-60min后加10%SDS 放37度30min后再加CTAB提取液就全裂解开了,很好用的,我提过好几株链霉菌基因组都可以的,不要用试剂盒和液氮研磨效果都不好。
7楼2015-05-12 10:47:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xh446063

新虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by yc652090251 at 2015-05-11 14:43:02
溶菌酶作用一般30-60min,因为不知道你的具体实验方法,你好好检查一下你的操作步骤,看看哪一步可能对dna产生讲解作用,我提的时候一般不会有降解现象出现的。你可以不用试剂盒提取试试。方法很多地方都有介绍的, ...

谢谢你的帮助,我用氯仿抽提的方法已经提出DNA了
8楼2015-05-24 16:55:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xh446063

新虫 (小有名气)

引用回帖:
7楼: Originally posted by syn1985 at 2015-05-12 10:47:03
链霉菌基因组你提取的时候用个小勺子挖一点溶菌酶扔进去就可以了,浓度可以大一些,37度放30-60min后加10%SDS 放37度30min后再加CTAB提取液就全裂解开了,很好用的,我提过好几株链霉菌基因组都可以的,不要用试剂盒 ...

谢谢你的回复,我改用氯仿苯酚抽提的方法提出来了

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

9楼2015-05-24 16:57:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xh446063

新虫 (小有名气)

送红花一朵
引用回帖:
5楼: Originally posted by 轩辕一剑 at 2015-05-11 18:04:25
可以试试索莱宝的一个土壤基因组试剂盒,非常强大的,提链霉菌的一点问题都没有

谢谢你的回复,我换了个方法,自己配的试剂已经提出来了
10楼2015-05-24 16:58:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 xh446063 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 0854 考研调剂 招生了!AI 方向 +3 pk3725069 2026-03-19 14/700 2026-03-23 14:44 by Jack_333
[考研] 一志愿上海交大生物与医药专硕324分,求调剂 +4 jiajunX 2026-03-22 4/200 2026-03-23 14:21 by xiaotangjing
[考研] 284求调剂 +6 Zhao anqi 2026-03-22 6/300 2026-03-23 09:23 by king123!
[考研] 求调剂 +6 十三加油 2026-03-21 6/300 2026-03-22 17:00 by i_cooler
[考研] 308求调剂 +3 墨墨漠 2026-03-21 3/150 2026-03-22 16:54 by i_cooler
[考研] 289求调剂 +7 怀瑾握瑜l 2026-03-20 7/350 2026-03-22 15:57 by ColorlessPI
[考研] 一志愿北京化工大学070300 学硕336求调剂 +5 vv迷 2026-03-21 8/400 2026-03-22 14:20 by ColorlessPI
[考研] 303求调剂 +5 安忆灵 2026-03-22 6/300 2026-03-22 12:46 by 素颜倾城1988
[考研] 生物学一志愿985,分数349求调剂 +4 zxts12 2026-03-21 7/350 2026-03-22 09:57 by zxts12
[考研] 297求调剂 +3 喜欢还是不甘心 2026-03-20 3/150 2026-03-21 18:33 by 学员8dgXkO
[考研] 【考研调剂】化学专业 281分,一志愿四川大学,诚心求调剂 +11 吃吃吃才有意义 2026-03-19 11/550 2026-03-21 18:23 by 学员8dgXkO
[考研] 278求调剂 +9 烟火先于春 2026-03-17 9/450 2026-03-21 17:47 by 学员8dgXkO
[考研] 311求调剂 +3 勇敢的小吴 2026-03-20 3/150 2026-03-21 17:40 by ColorlessPI
[考研] 336求调剂 +5 rmc8866 2026-03-21 5/250 2026-03-21 17:24 by 学员8dgXkO
[考研] 316求调剂 +6 梁茜雯 2026-03-19 6/300 2026-03-21 06:32 by Ecowxq666!
[考研] 303求调剂 +5 睿08 2026-03-17 7/350 2026-03-21 03:11 by JourneyLucky
[考研] 材料学硕297已过四六级求调剂推荐 +11 adaie 2026-03-19 11/550 2026-03-20 21:30 by laoshidan
[考研] 材料学求调剂 +4 Stella_Yao 2026-03-20 4/200 2026-03-20 20:28 by ms629
[考研] 一志愿西安交通大学 学硕 354求调剂211或者双一流 +3 我想要读研究生 2026-03-20 3/150 2026-03-20 20:13 by JourneyLucky
[考研] [导师推荐]西南科技大学国防/材料导师推荐 +3 尖角小荷 2026-03-16 6/300 2026-03-16 23:21 by 尖角小荷
信息提示
请填处理意见