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【求助】霉菌DNA提取方法
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| 求霉菌DNA的提取方法，用尿素法提了好几次成功,急啊，求高人相助！ |
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我用的方法，简单，易操作，你试试看，可能会成功，，，，，，
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amisking(金币+3): 鼓励发帖交流。 2011-04-04 20:15:42
321wangke321(金币+10): 2011-04-05 10:30:23
silicare(EPI+1): 2011-05-12 12:12:00
amisking(金币+3): 鼓励发帖交流。 2011-04-04 20:15:42
321wangke321(金币+10): 2011-04-05 10:30:23
silicare(EPI+1): 2011-05-12 12:12:00
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(1) 收集霉菌孢子并稀释涂布于贴有玻璃纸的PDA培养基中，培养20 h后收集新鲜菌丝体 (2) 取0.5 g 菌丝体置于冰预冷的研钵中，加入0.1 g石英砂和2 mL冰预冷的CTAB抽提液，加入蛋白酶K至终浓度0.1 mg/mL，置冰上研磨成均匀浑浊液； (3) 液体转入5 mL离心管并加入1/10体积的10% SDS，65℃温浴20～30 min后冷却至室温； (4) 加入等体积Tris饱和酚-氯仿（1:1）抽提2次，上层水相转入新的离心管； (5) 加入等体积氯仿抽提1次，上层水相转入新的离心管； (6) 加入无DNase活性的RNase A至终浓度10 g/mL，37℃温浴30～60 min； (7) 重复步骤5一次； (8) 上层水相加入2倍体积无水乙醇，轻轻混匀； (9) 用使用无菌移液器吸嘴轻轻挑出染色体DNA，在70%乙醇中洗涤一次，室温凉干残留乙醇； (10) 加适量体积的TE溶液溶解，保存于4 ℃。 |
2楼2011-04-04 19:33:59
3楼2011-04-05 10:31:03
4楼2011-10-23 17:45:19