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321wangke321

金虫 (正式写手)


[交流] 【求助】霉菌DNA提取方法

求霉菌DNA的提取方法,用尿素法提了好几次成功,急啊,求高人相助!
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ls2046

铁杆木虫 (职业作家)


我用的方法,简单,易操作,你试试看,可能会成功,,,,,,

★ ★ ★
amisking(金币+3): 鼓励发帖交流。 2011-04-04 20:15:42
321wangke321(金币+10): 2011-04-05 10:30:23
silicare(EPI+1): 2011-05-12 12:12:00
(1) 收集霉菌孢子并稀释涂布于贴有玻璃纸的PDA培养基中,培养20 h后收集新鲜菌丝体
(2) 取0.5 g 菌丝体置于冰预冷的研钵中,加入0.1 g石英砂和2 mL冰预冷的CTAB抽提液,加入蛋白酶K至终浓度0.1 mg/mL,置冰上研磨成均匀浑浊液;
(3) 液体转入5 mL离心管并加入1/10体积的10% SDS,65℃温浴20~30 min后冷却至室温;
(4) 加入等体积Tris饱和酚-氯仿(1:1)抽提2次,上层水相转入新的离心管;
(5) 加入等体积氯仿抽提1次,上层水相转入新的离心管;
(6) 加入无DNase活性的RNase A至终浓度10 g/mL,37℃温浴30~60 min;
(7) 重复步骤5一次;
(8) 上层水相加入2倍体积无水乙醇,轻轻混匀;
(9) 用使用无菌移液器吸嘴轻轻挑出染色体DNA,在70%乙醇中洗涤一次,室温凉干残留乙醇;
(10) 加适量体积的TE溶液溶解,保存于4 ℃。
2楼2011-04-04 19:33:59
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321wangke321

金虫 (正式写手)


引用回帖:
Originally posted by ls2046 at 2011-04-04 19:33:59:
(1) 收集霉菌孢子并稀释涂布于贴有玻璃纸的PDA培养基中,培养20 h后收集新鲜菌丝体
(2) 取0.5 g 菌丝体置于冰预冷的研钵中,加入0.1 g石英砂和2 mL冰预冷的CTAB抽提液,加入蛋白酶K至终浓度0.1 mg/mL,置冰上研磨 ...

谢谢,金币都给你。
3楼2011-04-05 10:31:03
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645329775

新虫 (小有名气)


谢谢  很好
4楼2011-10-23 17:45:19
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