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321wangke321

金虫 (正式写手)

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[交流] 【求助】霉菌DNA提取方法

求霉菌DNA的提取方法，用尿素法提了好几次成功,急啊，求高人相助！

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1楼 2011-04-04 18:38:17

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ls2046

铁杆木虫 (职业作家)

BioEPI: 1
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我用的方法，简单，易操作，你试试看，可能会成功，，，，，，

★ ★ ★
amisking(金币+3): 鼓励发帖交流。 2011-04-04 20:15:42
321wangke321(金币+10): 2011-04-05 10:30:23
silicare(EPI+1): 2011-05-12 12:12:00

(1) 收集霉菌孢子并稀释涂布于贴有玻璃纸的PDA培养基中，培养20 h后收集新鲜菌丝体
(2) 取0.5 g 菌丝体置于冰预冷的研钵中，加入0.1 g石英砂和2 mL冰预冷的CTAB抽提液，加入蛋白酶K至终浓度0.1 mg/mL，置冰上研磨成均匀浑浊液；
(3) 液体转入5 mL离心管并加入1/10体积的10% SDS，65℃温浴20～30 min后冷却至室温；
(4) 加入等体积Tris饱和酚-氯仿（1:1）抽提2次，上层水相转入新的离心管；
(5) 加入等体积氯仿抽提1次，上层水相转入新的离心管；
(6) 加入无DNase活性的RNase A至终浓度10 g/mL，37℃温浴30～60 min；
(7) 重复步骤5一次；
(8) 上层水相加入2倍体积无水乙醇，轻轻混匀；
(9) 用使用无菌移液器吸嘴轻轻挑出染色体DNA，在70%乙醇中洗涤一次，室温凉干残留乙醇；
(10) 加适量体积的TE溶液溶解，保存于4 ℃。

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2楼2011-04-04 19:33:59

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321wangke321

金虫 (正式写手)

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引用回帖:

Originally posted by ls2046 at 2011-04-04 19:33:59:
(1) 收集霉菌孢子并稀释涂布于贴有玻璃纸的PDA培养基中，培养20 h后收集新鲜菌丝体
(2) 取0.5 g 菌丝体置于冰预冷的研钵中，加入0.1 g石英砂和2 mL冰预冷的CTAB抽提液，加入蛋白酶K至终浓度0.1 mg/mL，置冰上研磨 ...

谢谢，金币都给你。

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3楼2011-04-05 10:31:03

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