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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 核酸提取 » 大量提取链霉菌DNA
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他她0328

银虫 (小有名气)

[求助] 大量提取链霉菌DNA

我要建库，克隆链霉菌内一段基因，但是现在大提DNA出现问题了，DNA提不出来，中间用苯酚抽提时的蛋白不是成层状的，而是跟霉菌似的毛状的，所以上清较难吸出来。只要出现这种情况就提不出DNA，所以请教大家一下这是什么造成的，是菌的问题吗？
跪求解答！

[ Last edited by silicare on 2014-2-18 at 15:14 ]
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1楼 2011-08-31 20:03:17
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wlsky24

新虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

用枪打散。应该可以提出来。
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2楼2011-09-01 12:16:34
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西瓜

荣誉版主 (知名作家)
引用回帖:
1楼: Originally posted by 他她0328 at 2011-08-31 20:03:17:
我要建库，克隆链霉菌内一段基因，但是现在大提DNA出现问题了，DNA提不出来，中间用苯酚抽提时的蛋白不是成层状的，而是跟霉菌似的毛状的，所以上清较难吸出来。只要出现这种情况就提不出DNA，所以请教大家一下这 ...

离心时间长一点试试吧
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3楼2011-09-01 18:12:43
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他她0328

银虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by wlsky24 at 2011-09-01 12:16:34:
用枪打散。应该可以提出来。

用枪打散菌丝体么？
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4楼2011-09-01 19:45:04
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wlsky24

新虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
dhd997(金币+2): good 2011-09-03 07:48:38
蛋白应该直接分层的啊。贴ep管壁取上清即可。絮状蛋白好像没有碰到过。多离心看看
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5楼2011-09-01 20:58:02
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weekend883

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

他她0328(金币+1): 2011-09-04 09:00:05
蛋白酶多消化一会就好了
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6楼2011-09-02 10:00:11
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他她0328

银虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by wlsky24 at 2011-09-01 20:58:02:
蛋白应该直接分层的啊。贴ep管壁取上清即可。絮状蛋白好像没有碰到过。多离心看看

小提时分层很明显，但是大提用50ml离心管做的时候就出现絮状蛋白了，上清很难吸出来。。。我把转速增大到12000rpm，效果还是不明显。。。跪求帮助
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7楼2011-09-02 12:47:54
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他她0328

银虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by weekend883 at 2011-09-02 10:00:11:
蛋白酶多消化一会就好了

蛋白酶作用了两个小时，出现絮状蛋白是蛋白酶解不充分的原因么？
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8楼2011-09-02 12:48:42
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wlsky24

新虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
dhd997(金币+2): good 2011-09-03 07:48:48
哦。我没有做过50ml,提取的。我都是小提的，而且没有用蛋白酶，只是用了溶菌酶。一般都可以提出来。
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9楼2011-09-02 16:10:56
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weekend883

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
8楼: Originally posted by 他她0328 at 2011-09-02 12:48:42:
蛋白酶作用了两个小时，出现絮状蛋白是蛋白酶解不充分的原因么？

我以前遇到过，多消化下就好了，体系放大点，多加点蛋白酶，多加点缓冲液，把你的过程贴出来，大家帮你分析下呗
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10楼2011-09-02 17:40:31
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