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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 微波法提取链霉菌DNA
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wlsky24

新虫 (正式写手)

[求助] 微波法提取链霉菌DNA

哪位有微波法提取链霉菌DNA的具体方法步骤哦，能否共享下，不甚感激
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1楼 2011-09-03 13:52:23
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瓶儿花

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
wlsky24(金币+2): 非常感谢，麻烦问下有没有什么要特别注意的事项？ 2011-09-04 13:07:05
wolfebst(金币+5, MicEPI+1): 鼓励 2011-09-04 15:52:16
1.刮取适量生长良好的纯化菌落于eppendorf管中，加入洗涤液lmL，振荡混匀;
2.离心收集菌丝;
3.加入35μL裂解液，振荡混匀，于功率为600W微波炉中处理60s;
4.加入400μL65℃预热的抽提液，振荡混匀;加入等体积的苯酚/氯仿抽提，离心收集上清;
5.加入异丙醇沉淀，70%乙醇洗涤，室温干燥，加入适量TE溶解。
洗涤液:50mmol/LTris，pH8.0，25mmol/L EDAT，0.1%PVP。
裂解液:50mmol/LTris，pH8.0，25mmol/L EDAT，3%SDS，1.2%PVP。
抽提液:10mmol/LTris，pH8.0，l mmol/L EDAT，0.3mol/LNaAC，1.21%PVP。
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2楼2011-09-04 09:55:17
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瓶儿花

金虫 (小有名气)
试剂和离心管以及移液枪的枪头都要灭过菌后才能使用，微波炉中加热时间不能过长，且功率不宜过大。乙醇洗涤后要尽量将乙醇挥发干，但也不能时间放置过长，不然DNA将不能溶解到TE中。抽提收集上清时要尽量不要将苯酚氯仿抽提上来，不然会影响你后续的一些试验的。比如说酶切等。。。。
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3楼2011-09-04 13:37:42
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wlsky24

新虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 瓶儿花 at 2011-09-04 13:37:42:
试剂和离心管以及移液枪的枪头都要灭过菌后才能使用，微波炉中加热时间不能过长，且功率不宜过大。乙醇洗涤后要尽量将乙醇挥发干，但也不能时间放置过长，不然DNA将不能溶解到TE中。抽提收集上清时要尽量不要将苯 ...

thanks.能否留个邮箱，方便请教？
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4楼2011-09-04 14:42:54
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瓶儿花

金虫 (小有名气)
bbcyp364491148@163.com
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5楼2011-09-04 15:07:37
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