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wlsky24

新虫 (正式写手)

[求助] 微波法提取链霉菌DNA

哪位有微波法提取链霉菌DNA的具体方法步骤哦,能否共享下,不甚感激
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瓶儿花

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
wlsky24(金币+2): 非常感谢,麻烦问下有没有什么要特别注意的事项? 2011-09-04 13:07:05
wolfebst(金币+5, MicEPI+1): 鼓励 2011-09-04 15:52:16
1.刮取适量生长良好的纯化菌落于eppendorf管中,加入洗涤液lmL,振荡混匀;
2.离心收集菌丝;
3.加入35μL裂解液,振荡混匀,于功率为600W微波炉中处理60s;
4.加入400μL65℃预热的抽提液,振荡混匀;加入等体积的苯酚/氯仿抽提,离心收集上清;
5.加入异丙醇沉淀,70%乙醇洗涤,室温干燥,加入适量TE溶解。
洗涤液:50mmol/LTris,pH8.0,25mmol/L EDAT,0.1%PVP。
裂解液:50mmol/LTris,pH8.0,25mmol/L EDAT,3%SDS,1.2%PVP。
抽提液:10mmol/LTris,pH8.0,l mmol/L EDAT,0.3mol/LNaAC,1.21%PVP。
2楼2011-09-04 09:55:17
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瓶儿花

金虫 (小有名气)

试剂和离心管以及移液枪的枪头都要灭过菌后才能使用,微波炉中加热时间不能过长,且功率不宜过大。乙醇洗涤后要尽量将乙醇挥发干,但也不能时间放置过长,不然DNA将不能溶解到TE中。抽提收集上清时要尽量不要将苯酚氯仿抽提上来,不然会影响你后续的一些试验的。比如说酶切等。。。。
3楼2011-09-04 13:37:42
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wlsky24

新虫 (正式写手)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 瓶儿花 at 2011-09-04 13:37:42:
试剂和离心管以及移液枪的枪头都要灭过菌后才能使用,微波炉中加热时间不能过长,且功率不宜过大。乙醇洗涤后要尽量将乙醇挥发干,但也不能时间放置过长,不然DNA将不能溶解到TE中。抽提收集上清时要尽量不要将苯 ...

thanks.能否留个邮箱,方便请教?
4楼2011-09-04 14:42:54
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瓶儿花

金虫 (小有名气)

5楼2011-09-04 15:07:37
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