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xh446063

新虫 (小有名气)

[求助] 链霉菌DNA提取 已有4人参与

最近一直在做链霉菌总DNA的提取,选用天根的细菌DNA提取试剂盒,但是尝试了多次都没有成功。我用的是20mg/mL 的溶菌酶37℃,水浴3h甚至更长时间,后续操作按照试剂盒说明书进行,但是都没有提出来。是不是溶菌酶处理不彻底,大家都用多大浓度的溶菌酶作用多长时间?是否有更好的方法能推荐一下。恳请赐教!!
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15671627439

新虫 (初入文坛)

送红花一朵
引用回帖:
9楼: Originally posted by xh446063 at 2015-05-24 16:57:44
谢谢你的回复,我改用氯仿苯酚抽提的方法提出来了...

你好,能给一下你的氯仿苯酚抽提的具体方法么?我也在提一个链霉菌的,半个多月了也没提出来。非常感谢!
13楼2016-09-14 08:30:40
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yc652090251

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
可以先用液氮将菌体研磨一下,然后在提。
低调做人好么~~
2楼2015-05-08 10:06:39
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xh446063

新虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by yc652090251 at 2015-05-08 10:06:39
可以先用液氮将菌体研磨一下,然后在提。

我尝试过用玻璃匀浆管研磨菌体,但是提出来的DNA都降解了,琼脂糖电泳整个泳道都是亮的。
3楼2015-05-11 12:31:39
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yc652090251

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
xh446063: 金币+3, ★★★很有帮助 2015-05-24 16:54:38
引用回帖:
3楼: Originally posted by xh446063 at 2015-05-11 12:31:39
我尝试过用玻璃匀浆管研磨菌体,但是提出来的DNA都降解了,琼脂糖电泳整个泳道都是亮的。...

溶菌酶作用一般30-60min,因为不知道你的具体实验方法,你好好检查一下你的操作步骤,看看哪一步可能对dna产生讲解作用,我提的时候一般不会有降解现象出现的。你可以不用试剂盒提取试试。方法很多地方都有介绍的,只要按部就班的去弄,不会出问题的。
低调做人好么~~
4楼2015-05-11 14:43:02
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