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枫大帅木虫 (著名写手)
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[求助]
水煮法提取幽门螺杆菌的DNA 已有1人参与
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用水煮法提取幽门螺杆菌的DNA容易受哪些因素影响？为什么我提取的浓度比较低？ 如何提高DNA提取浓度？请各位兄弟姐妹们支个招，具体的操作步骤，越详细越好，跪谢大家了。。  |
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xiaoamuchong
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水煮法：革兰氏阴性杆菌取过夜培养的菌液1.5mL加入到离心管中离心l1min，弃上清；沉淀加入0.6ml无菌去离子水，振i荡混匀，100℃水浴10min后离心，上清作为DNA模板-20℃保存备用。革兰氏阳性菌及革兰氏阴性球菌取过夜培养的菌液1.5mL加入到离心管中离心l1min，弃上清；沉淀加入800ul丙酮后混均，放入-20℃冰箱中冰浴10min，7500rpm/rnin离心5min．弃上清，沉淀在室温下放置5min．使丙酮蒸发干，再加入TE 100ul、10mg/ml溶菌酶100ul，37℃温育20min．离心，沉淀加人TE600ul重悬．再加入15mg／ml蛋白酶K25ul．55℃温育1h后煮10min，离心．上清作为DNA模板-20℃保存备用。 水煮法得到的DNA浓度比传统法要高，主要因为水煮法步骤简洁，减少了操作过程中对DNA的损失及外源DNA污染机会。水煮法提取过程中不需要酚一氯仿抽提及乙醇沉淀，避免了对人体的危害，且所需费用低，但水煮法提取的DNA纯度较传统法有小幅下降，主要是因为抽提过程简单，DNA溶液中含有蛋白质等杂质无法完全去除。水煮法适用于对DNA纯度要求不高的PcR、RAPD等实验。 |
2楼2014-04-24 19:26:51
xiaoamuchong
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