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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 水煮法提取幽门螺杆菌的DNA
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枫大帅

木虫 (著名写手)

[求助] 水煮法提取幽门螺杆菌的DNA已有1人参与

用水煮法提取幽门螺杆菌的DNA容易受哪些因素影响？为什么我提取的浓度比较低？

如何提高DNA提取浓度？请各位兄弟姐妹们支个招，具体的操作步骤，越详细越好，跪谢大家了。。
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1楼2014-04-24 19:02:11
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xiaoamuchong

专家顾问 (职业作家)

科研工作者

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
dllchina: 金币+3 2014-04-24 21:27:19
枫大帅: 金币+10, ★★★很有帮助 2014-04-24 21:37:15
水煮法：革兰氏阴性杆菌取过夜培养的菌液1.5mL加入到离心管中离心l1min，弃上清；沉淀加入0.6ml无菌去离子水，振i荡混匀，100℃水浴10min后离心，上清作为DNA模板-20℃保存备用。革兰氏阳性菌及革兰氏阴性球菌取过夜培养的菌液1.5mL加入到离心管中离心l1min，弃上清；沉淀加入800ul丙酮后混均，放入-20℃冰箱中冰浴10min，7500rpm/rnin离心5min．弃上清，沉淀在室温下放置5min．使丙酮蒸发干，再加入TE 100ul、10mg/ml溶菌酶100ul，37℃温育20min．离心，沉淀加人TE600ul重悬．再加入15mg／ml蛋白酶K25ul．55℃温育1h后煮10min，离心．上清作为DNA模板-20℃保存备用。
水煮法得到的DNA浓度比传统法要高，主要因为水煮法步骤简洁，减少了操作过程中对DNA的损失及外源DNA污染机会。水煮法提取过程中不需要酚一氯仿抽提及乙醇沉淀，避免了对人体的危害，且所需费用低，但水煮法提取的DNA纯度较传统法有小幅下降，主要是因为抽提过程简单，DNA溶液中含有蛋白质等杂质无法完全去除。水煮法适用于对DNA纯度要求不高的PcR、RAPD等实验。
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曾经有人问我为什么要学微生物，我只是想离生命的本质更近一点。
2楼2014-04-24 19:26:51
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xiaoamuchong

专家顾问 (职业作家)

科研工作者
引用回帖:
2楼: Originally posted by xiaoamuchong at 2014-04-24 19:26:51
水煮法：革兰氏阴性杆菌取过夜培养的菌液1.5mL加入到离心管中离心l1min，弃上清；沉淀加入0.6ml无菌去离子水，振i荡混匀，100℃水浴10min后离心，上清作为DNA模板-20℃保存备用。革兰氏阳性菌及革兰氏阴性球菌取过夜 ...

提高浓度的话多取点菌就可以了。。
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枫大帅
曾经有人问我为什么要学微生物，我只是想离生命的本质更近一点。
3楼2014-04-24 19:29:39
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枫大帅

木虫 (著名写手)
送红花一朵
引用回帖:
3楼: Originally posted by xiaoamuchong at 2014-04-24 19:29:39
提高浓度的话多取点菌就可以了。。...

谢谢你的帮助，我再试试提取
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4楼2014-04-24 21:35:51
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liaobuqi138

铁虫 (初入文坛)
你好！
你那有什么菌株，我最近做幽门螺杆菌的功能基因分析，您可以惠赠或我购买些幽门螺杆菌的基因组吗？万分感谢！！
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淡泊明志，宁静致远
5楼2015-01-19 14:26:44
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