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微生物液氮冻融法DNA提取 已有3人参与
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用的方法为2.细胞破碎：取 1 管菌体沉淀用 600μl 细胞裂解液充分悬浮，然后在液氮30s和 65℃水浴30s中反复冻融 5 次，37℃水浴 10min ；加 30μl 溶菌酶（50mg/mL），加入 30μlSDS 溶液（10%），37℃水浴 30min ；为什么提出的条带是这样子的。 总DNA条带 |
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2楼2014-01-08 22:42:04
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具体步骤是这样子的：1.样品处理：5 g豆豉样品加入45 mL灭过菌的生理盐水,振荡30 min,取5 mL溶液置于10 mL离心管中, 400 r/min,离心10 min去沉淀, 8 000rpm/min离心10 min,去上清,菌体用无菌PBS洗3遍后转入2 mL离心管。 2.细胞破碎：取 1 管菌体沉淀用 600μl 细胞裂解液充分悬浮，然后在液氮30s和 65℃水浴30s中反复冻融 5 次，37℃水浴 10min ；加 30μl 溶菌酶（50mg/mL），加入 30μlSDS 溶液（10%），37℃水浴 30min ； 3.提取纯化：随后加入等体积的酚：氯仿：异戊醇（25：24:1），抽提2次，于冰上放置 5min，12000rpm 离心 5min，氯仿：异戊醇（24:1）抽提，于冰上放置 5min，12000rpm 离心 5min，将上清液转移到新的无菌离心管中，直至上清液清澈透明，最后将上清液转入 1.5mL EP 管中； 4.沉淀收集DNA:加入0.8体积的异丙醇，1/10 体积的乙酸钠，轻轻混匀，于-20℃沉淀 30min；12000rpm，离心 5min，弃上清，加入 1mL 预冷的 70% 乙醇，洗涤两次，12000rpm，离心 5min，弃上清后室温自然风干，加入 30μl ddH2O，使 DNA 溶解。 试剂配制： 1. 细胞裂解液: 细胞裂解液：CTAB 10-50g/L; NaCl 1.0mol/L; EDTA 50mmol/L; Tris 250mmol/L; 用稀盐酸调节 pH 至 8.0。 2. 溶菌酶（50mg/mL） 3. 氯仿：异戊醇（24:1） 4.异丙醇 5. 乙酸钠 6. 70% 乙醇 7. SDS 溶液（10%） |
3楼2014-01-09 09:03:17
wangweijian
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