| 查看: 4667 | 回复: 8 | |||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | |||
[交流]
微生物液氮冻融法DNA提取 已有3人参与
|
|||
用的方法为2.细胞破碎：取 1 管菌体沉淀用 600μl 细胞裂解液充分悬浮，然后在液氮30s和 65℃水浴30s中反复冻融 5 次，37℃水浴 10min ；加 30μl 溶菌酶（50mg/mL），加入 30μlSDS 溶液（10%），37℃水浴 30min ；为什么提出的条带是这样子的。 总DNA条带 |
回复此楼» 猜你喜欢
Wnt-C59：PORCN靶向化学探针，Wnt信号通路阻断机制与科研应用全解析
已经有0人回复
-
Fexaramine：肠道限制性FXR化学探针，结构特征与信号通路研究全解析
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有219人回复
-
NVS-STG2：靶向STING跨膜域的分子胶类激动剂，结构特征与寡聚化机制研究全解析
已经有0人回复
-
DOTA-GPC3肽（CAS 3066439-94-6）：双功能分子探针前体的结构特征与标记应用解析
已经有0人回复
-
科研用 TLR7/8 双激动剂怎么选？现货与质控要点
已经有0人回复
-
SEL120-34A HCl：CDK8/CDK19高选择性激酶抑制剂
已经有0人回复
-
氢氧化钾活化操作
已经有18人回复
-
散金
已经有68人回复
-
生物质超级电容器
已经有0人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 填料微生物用试剂盒提取DNA失败
已经有8人回复
- 用Fast DNA spin kit for soil试剂盒提取微生物总DNA
已经有4人回复
- 提取幽门螺杆菌基因组DNA
已经有4人回复
- 真菌菌丝体提取DNA问题
已经有10人回复
- 天根试剂盒提取，液氮研磨，DNA 提取不出来
已经有6人回复
- 猪粪中细菌总DNA的提取
已经有15人回复
- 求助 水样中总DNA 的提取！
已经有23人回复
- 土壤微生物DNA提取不出来，是什么原因？
已经有19人回复
- 固氮根瘤菌基因组DNA的提取
已经有7人回复
- 怎样从酸奶里提取乳酸菌DNA呀
已经有9人回复
- 鱼肠道微生物DNA的提取方法
已经有22人回复
- 在用液氮研磨样品提取DNA时，最需要注意什么问题？
已经有5人回复
- 请问大家，提取DNA时液氮研磨组织或植物叶片的作用是什么？
已经有10人回复
- 细菌基因组DNA提取 交流
已经有18人回复
- 破细菌细胞壁时冻融时间以及温度的选择
已经有6人回复
- 血液中提取细菌DNA
已经有5人回复
- 环境样品地下水中细菌总DNA的提取方法
已经有23人回复
- CTAB提取液保存了一段时间，有白色漂浮物，可以用来直接提取真菌DNA吗？
已经有3人回复
- 提取土壤DNA，如何去除腐殖质等PCR抑制物？
已经有17人回复
- 放线菌基因组DNA提取
已经有6人回复
- 丝状真菌提取总DNA问题
已经有14人回复
- 【求助/交流】提取的DNA在-20℃下保存后，怎样解冻？
已经有31人回复
- 【求助/交流】提取真菌DNA或RNA一定要液氮研磨吗？
已经有7人回复
- 【求助/交流】有没有人做过用水煮法提取DNA的啊，望赐教
已经有21人回复
wangweijian
金虫 (小有名气)
- 应助: 24 (小学生)
- 金币: 763
- 散金: 9
- 红花: 2
- 帖子: 208
- 在线: 89.5小时
- 虫号: 1090081
- 注册: 2010-09-05
- 专业: 女性生殖系统肿瘤
4楼2014-01-09 12:09:21
2楼2014-01-08 22:42:04
|
具体步骤是这样子的：1.样品处理：5 g豆豉样品加入45 mL灭过菌的生理盐水,振荡30 min,取5 mL溶液置于10 mL离心管中, 400 r/min,离心10 min去沉淀, 8 000rpm/min离心10 min,去上清,菌体用无菌PBS洗3遍后转入2 mL离心管。 2.细胞破碎：取 1 管菌体沉淀用 600μl 细胞裂解液充分悬浮，然后在液氮30s和 65℃水浴30s中反复冻融 5 次，37℃水浴 10min ；加 30μl 溶菌酶（50mg/mL），加入 30μlSDS 溶液（10%），37℃水浴 30min ； 3.提取纯化：随后加入等体积的酚：氯仿：异戊醇（25：24:1），抽提2次，于冰上放置 5min，12000rpm 离心 5min，氯仿：异戊醇（24:1）抽提，于冰上放置 5min，12000rpm 离心 5min，将上清液转移到新的无菌离心管中，直至上清液清澈透明，最后将上清液转入 1.5mL EP 管中； 4.沉淀收集DNA:加入0.8体积的异丙醇，1/10 体积的乙酸钠，轻轻混匀，于-20℃沉淀 30min；12000rpm，离心 5min，弃上清，加入 1mL 预冷的 70% 乙醇，洗涤两次，12000rpm，离心 5min，弃上清后室温自然风干，加入 30μl ddH2O，使 DNA 溶解。 试剂配制： 1. 细胞裂解液: 细胞裂解液：CTAB 10-50g/L; NaCl 1.0mol/L; EDTA 50mmol/L; Tris 250mmol/L; 用稀盐酸调节 pH 至 8.0。 2. 溶菌酶（50mg/mL） 3. 氯仿：异戊醇（24:1） 4.异丙醇 5. 乙酸钠 6. 70% 乙醇 7. SDS 溶液（10%） |
3楼2014-01-09 09:03:17
5楼2014-01-10 10:00:07
10