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新虫 (小有名气)

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[交流] 融合蛋白表达问题。

几个蛋白融合表达，转染真核细胞，western有的蛋白能检测到，有的蛋白检测不到？ORF没有问题。

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1楼 2015-05-07 16:50:36

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mazhenggen

铁虫 (正式写手)

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★
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导致蛋白不表达的因素很多：1、确定基因插入到宿主细胞基因组中，位置是否合适，拷贝数有多少，可以通过PCR和Southern blot检测；2、检测细胞中目的蛋白mRNA水平，验证DNA的转录是否有问题。3、如果mRNA正常，那么有可能是融合蛋白结构不稳定导致降解，降解的因素也有很多，像蛋白结构不稳定容易被细胞中蛋白水解酶降解，还有融合蛋白对细胞的代谢有影响，抑制蛋白表达，也有可能蛋白的mRNA不稳定，半衰期短容易降解。
楼主可以逐个排除蛋白不表达的因素，找到原因问题就可以好解决了，希望回复有用。