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站着别动君

新虫 (小有名气)

[交流] 融合蛋白表达问题。

几个蛋白融合表达,转染真核细胞,western有的蛋白能检测到,有的蛋白检测不到?ORF没有问题。
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mazhenggen

铁虫 (正式写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
导致蛋白不表达的因素很多:1、确定基因插入到宿主细胞基因组中,位置是否合适,拷贝数有多少,可以通过PCR和Southern blot检测;2、检测细胞中目的蛋白mRNA水平,验证DNA的转录是否有问题。3、如果mRNA正常,那么有可能是融合蛋白结构不稳定导致降解,降解的因素也有很多,像蛋白结构不稳定容易被细胞中蛋白水解酶降解,还有融合蛋白对细胞的代谢有影响,抑制蛋白表达,也有可能蛋白的mRNA不稳定,半衰期短容易降解。
楼主可以逐个排除蛋白不表达的因素,找到原因问题就可以好解决了,希望回复有用。
我喜欢所以我做
6楼2015-05-17 10:26:40
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恶魔的左眼

木虫 (正式写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
这问题问的。。。好歹说的详细点啊。。。资料这么少,鬼才知道为什么没有咧
早上一副睡不醒的样子,下午一副没睡醒的样子,晚上一副打了鸡血的样子!
4楼2015-05-12 14:31:21
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zmxwfd

新虫 (初入文坛)

你想问什么。。。。
5楼2015-05-15 20:46:22
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肖大爷1314

金虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
LZ做哺乳动物表达蛋白,也得给个具体点的例子吧,比如什么蛋白,感觉楼主问的怪怪的~祝好!
追求真理的道路上永远不会孤独
7楼2015-12-29 11:14:37
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