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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 求助 基因一直突变的问题
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ZQS2013

铜虫 (初入文坛)

[求助] 求助 基因一直突变的问题已有2人参与

求助:  我说下我的问题   想把一段信号肽序列和一段基因序列连接到同一载体上  (基因就连接到信号肽后面 ) 我是分别连上去的   可拿到的克隆总是会出现一个碱基的缺失  一开始觉得有突变的可能   然后就一直做  都半年多了  拿到的克隆全部是有一个不同位点的碱基的缺失  缺失的位点有时候是信号肽  有的是基因的前100BP内的
奇怪的是我把测序正确的信号肽和基因切下来组合到一块时  又出现了新的突变位点   不知道是原因导致了这种结果    求虫友解惑
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1楼2015-04-27 20:58:34
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ZQS2013

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by starseacow at 2015-04-28 09:23:32
1 楼主是否采用高保真酶？
2 出现突变位点是在测序结果的前100-200个碱基或最后部分碱基吗？如果是，那就是测序的问题，最好设计反向引物再测一下

用的是高保真的   其实让我奇怪的是   构建好的质粒中有信号肽测序没问题的  也有基因测序没问题的   我就切下来  组合在一起   就是又会发生新的突变   这应该不是测序的问题了吧
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3楼2015-04-28 09:34:02
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starseacow

专家顾问 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
ZQS2013: 金币+3 2015-04-28 10:04:17
1 楼主是否采用高保真酶？
2 出现突变位点是在测序结果的前100-200个碱基或最后部分碱基吗？如果是，那就是测序的问题，最好设计反向引物再测一下
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植物生理群69993869，为避免广告，申请加入请提供木虫昵称，院校及专业信息
2楼2015-04-28 09:23:32
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starseacow

专家顾问 (职业作家)
引用回帖:
3楼: Originally posted by ZQS2013 at 2015-04-28 09:34:02
用的是高保真的   其实让我奇怪的是   构建好的质粒中有信号肽测序没问题的  也有基因测序没问题的   我就切下来  组合在一起   就是又会发生新的突变   这应该不是测序的问题了吧...

照你这么说，我感觉是测序的问题，你用的哪家公司，用反向引物再测一下或者换家公司？
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植物生理群69993869，为避免广告，申请加入请提供木虫昵称，院校及专业信息
4楼2015-04-28 09:37:11
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ZQS2013

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by starseacow at 2015-04-28 09:37:11
照你这么说，我感觉是测序的问题，你用的哪家公司，用反向引物再测一下或者换家公司？...

原来一直是在华大科技测序的    试过在别家重测过   结果一样
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5楼2015-04-28 09:40:50
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