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xingyun789金虫 (小有名气)
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[求助]
有关Western Blot 结果方面的求助 已有2人参与
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以下是我最近做的WB结果，其中，红方框内是我的目的条带，下面的那条带是非特异带，箭头所指处有一些背景，我封闭的时间是1.5个小时，用的是5%脱脂奶粉，一抗1:500 （鼠源多抗，效价不是很高），4℃孵育过夜，然后TBST洗脱3次，每次10min，二抗1:1000常温孵育2小时，然后TBST洗脱3次，每次10分钟，完毕后用ECL发光法进行曝光，黑暗下发光很弱，因此曝光时间约2min，请问，出现这样的情况该如何进行改进，谢谢！ 360截图20150427091728531.jpg |
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2楼2015-04-27 14:59:29
18761615793
木虫 (正式写手)
小虫
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【答案】应助回帖
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kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2015-04-28 09:24:30
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一抗二抗封闭一小时即可（封闭的时候在震床上轻轻摇晃或轻微震荡），每次用PBS洗的时候也要轻轻晃动，牛奶封闭的时间一小时左右，还有加入抗体4度过夜，可以改为室温震荡封闭1小时，你的整体用时都偏长，可以减少时间，过程中注意每一步的洗涤，虽然有背景，但是不算严重 这是有关WB问题，总结的挺好，可以看看http://www.detaibio.com/material-western-blot-faq.html |
3楼2015-04-27 15:17:48
