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19910204

新虫 (小有名气)

[求助] RT-PCR融解曲线前面凹凸不平,求帮忙分析? 已有2人参与

反转录完之后cDNA在-20存放了五六天时间(期间没有拿出来冻融过),之后拿出来做定量,跑出来的扩增曲线很好,但是融解曲线前面凹凸不平。一个实验室老师说cDNA最好在反转录完3天内做定量,难道是因为模板不行了?求大家帮忙分析
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dxd1219

银虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
最好是用新鲜的cDNA去做比较好,但是你这种情况应该也没问题啊。会不会是操作的问题呢?或者是产生了引物二聚体?
在哪儿跌倒就在哪儿歇会儿……
2楼2015-04-15 16:15:26
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hkj710

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
凸凹不平也很正常,就看你的凸凹不平与你的目的产物的TM值的荧光值之间的差异性了,如果之间相差很近,说明有非特异性产物了,如果相差很大,形象的说就是,目的产物的峰值像山峰,而凸凹不平连土包都算不上,那就是背景值,不用在意
3楼2015-04-16 03:36:11
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