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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » RT-PCR融解曲线前面凹凸不平，求帮忙分析？
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19910204

新虫 (小有名气)

[求助] RT-PCR融解曲线前面凹凸不平，求帮忙分析？ 已有2人参与

反转录完之后cDNA在-20存放了五六天时间（期间没有拿出来冻融过），之后拿出来做定量，跑出来的扩增曲线很好，但是融解曲线前面凹凸不平。一个实验室老师说cDNA最好在反转录完3天内做定量，难道是因为模板不行了？求大家帮忙分析
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1楼 2015-04-15 09:38:23
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dxd1219

银虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
最好是用新鲜的cDNA去做比较好，但是你这种情况应该也没问题啊。会不会是操作的问题呢？或者是产生了引物二聚体？
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在哪儿跌倒就在哪儿歇会儿……
2楼2015-04-15 16:15:26
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hkj710

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
凸凹不平也很正常，就看你的凸凹不平与你的目的产物的TM值的荧光值之间的差异性了，如果之间相差很近，说明有非特异性产物了，如果相差很大，形象的说就是，目的产物的峰值像山峰，而凸凹不平连土包都算不上，那就是背景值，不用在意
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3楼2015-04-16 03:36:11
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