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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » RACE后是单链的cDNA吗？
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混合配搭

新虫 (小有名气)

[交流] RACE后是单链的cDNA吗？

RACE后测得的序列是单链的cDNA吗？要是单链的话。可以用单链的序列BLAST，从而进行分析吗？刚接触，希望有好心的大神讲解一下哦。
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1楼 2015-04-15 00:04:42
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hailunl

金虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
11楼: Originally posted by 混合配搭 at 2015-04-16 11:12:58
可是，它是以CDNA为模版，怎么变成双链的啊？
...

无论是5‘还是3’RACE都是以cDNA为模板，迅速向一端合成，它涉及到rTaq,即以cDNA为模板，合成了双链的DNA，万变万变不离其宗都是DNA拓扑异构酶的原理。
如果你实在不懂，看看朱玉贤分子生物学，或者看看clontech的RACE说明书。
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17楼2015-04-16 18:29:16
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普通回帖

mlbiosci

新虫 (正式写手)
★
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2015-04-15 22:07:34
Race后也是基于反转录，以cdna为模板pcr得到的序列测序
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2楼2015-04-15 00:20:37
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混合配搭

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by mlbiosci at 2015-04-15 00:20:37
Race后也是基于反转录，以cdna为模板pcr得到的序列测序

哦，那就是说扩增出来的就是Cdna 的全长呗。
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3楼2015-04-15 07:53:44
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mlbiosci

新虫 (正式写手)
★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
混合配搭: 金币+2 2015-04-15 13:51:31
引用回帖:
3楼: Originally posted by 混合配搭 at 2015-04-15 07:53:44
哦，那就是说扩增出来的就是Cdna 的全长呗。...

不见得是全长，看你从哪个地方开始进行，最少也是5“  3“ 两个部分，分别测序后序列组装

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4楼2015-04-15 08:44:32
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混合配搭

新虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by mlbiosci at 2015-04-15 08:44:32
不见得是全长，看你从哪个地方开始进行，最少也是5“  3“ 两个部分，分别测序后序列组装
...

那可以根据扩增出来的序列分析基因功能吗

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5楼2015-04-15 13:52:22
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hailunl

金虫 (正式写手)
不是，是双链的。
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6楼2015-04-15 16:29:33
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混合配搭

新虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by hailunl at 2015-04-15 16:29:33
不是，是双链的。

啊？你是说RACE之后，得到的是双链DNA ？

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7楼2015-04-15 22:35:01
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hailunl

金虫 (正式写手)
引用回帖:
7楼: Originally posted by 混合配搭 at 2015-04-15 22:35:01
啊？你是说RACE之后，得到的是双链DNA ？
...

是的，是双链，可以连到T载
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8楼2015-04-15 22:40:57
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mlbiosci

新虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
5楼: Originally posted by 混合配搭 at 2015-04-15 13:52:22
那可以根据扩增出来的序列分析基因功能吗
...

准确来说未知基因要独立重复三次以上实验并测序，确保得到的序列不是因为pcr引入突变，然后根据序列进行生物信息学分析，最后最好加以生物功能实验验证

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9楼2015-04-16 00:17:11
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混合配搭

新虫 (小有名气)
引用回帖:
9楼: Originally posted by mlbiosci at 2015-04-16 00:17:11
准确来说未知基因要独立重复三次以上实验并测序，确保得到的序列不是因为pcr引入突变，然后根据序列进行生物信息学分析，最后最好加以生物功能实验验证
...

生物功能？具体是什么啊？刚接触不太懂

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10楼2015-04-16 11:11:41
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