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clbb1030木虫 (小有名气)
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【求助/交流】如何合成cDNA第二条链已有3人参与
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| 想请教坛子里的高手，有人做过cDNA文库吗？我现在想合成cDNA的第二条链，可以采用什么方法呢？需要什么试剂？有合成第二条链的试剂盒吗？还有就是，合成的双链cDNA混合物还需要分开之后再连接载体吗？还是用双链混合物直接连载体，测序？谢谢！ |
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ben1147
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小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
lstt09nk(金币+2):热心的ben 2010-09-10 15:28:38
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lstt09nk(金币+2):热心的ben 2010-09-10 15:28:38
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一个例子： cDNA第二链合成：按下表加样，12℃温育2h，22℃温育2h First Strand reaction mixture 40μl 10×E.Coli DNA ligase Buffer 16μl 10mM dNTP mix 3μl 0.1M DTT 6μl E.Coli DNA ligase (60U/μl) 0.25μl 15U DNA Polymerase I (5U/μl) 10μl 50U RNase H (5U/μl) 0.03μl 1.6U H2O 84.72μl Final Volume 160μl 试剂盒也有，比如Promega的Universal RiboClone cDNA Synthesis System，里面就包含从RNA反转录成cDNA第一链，以及合成cDNA第二链所需的试剂 |
2楼2010-09-09 11:56:02
clbb1030
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