应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】如何合成cDNA第二条链
61/1返回列表
查看: 3491  |  回复: 5
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

clbb1030

木虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】如何合成cDNA第二条链 已有3人参与

想请教坛子里的高手，有人做过cDNA文库吗？我现在想合成cDNA的第二条链，可以采用什么方法呢？需要什么试剂？有合成第二条链的试剂盒吗？还有就是，合成的双链cDNA混合物还需要分开之后再连接载体吗？还是用双链混合物直接连载体，测序？谢谢！
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2010-09-09 10:32:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ben1147

木虫 (正式写手)
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
lstt09nk(金币+2):热心的ben 2010-09-10 15:28:38
一个例子：
cDNA第二链合成：按下表加样，12℃温育2h，22℃温育2h
First Strand reaction mixture        40μl       
10×E.Coli DNA ligase Buffer        16μl       
10mM dNTP mix                          3μl       
0.1M DTT                                          6μl       
E.Coli DNA ligase (60U/μl)           0.25μl        15U
DNA Polymerase I (5U/μl)         10μl        50U
RNase H (5U/μl)                       0.03μl        1.6U
H2O                                     84.72μl       
Final Volume                        160μl       


试剂盒也有，比如Promega的Universal RiboClone  cDNA Synthesis System，里面就包含从RNA反转录成cDNA第一链，以及合成cDNA第二链所需的试剂
赞一下(3人) 回复此楼
2楼2010-09-09 11:56:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

clbb1030

木虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by ben1147 at 2010-09-09 11:56:02:
一个例子：
cDNA第二链合成：按下表加样，12℃温育2h，22℃温育2h
First Strand reaction mixture        40μl       
10×E.Coli DNA ligase Buffer        16μl       
10mM dNTP mix                          3μl       
0.1M DTT                   ...

谢谢高手指教，这个体系的前提是不是在我有第一条链的基础上的啊？
赞一下 回复此楼
3楼2010-09-09 12:24:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ben1147

木虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by clbb1030 at 2010-09-09 12:24:12:

谢谢高手指教，这个体系的前提是不是在我有第一条链的基础上的啊？

是的

第一链合成就是一般的反转录反应，这个应该好找吧
赞一下(1人) 回复此楼
4楼2010-09-10 13:16:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

clbb1030

木虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by ben1147 at 2010-09-10 13:16:53:

是的

第一链合成就是一般的反转录反应，这个应该好找吧

恩，我会做反转录。谢谢！非常感谢！
赞一下 回复此楼
5楼2010-09-11 10:55:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

说说看

铁虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
5楼: Originally posted by clbb1030 at 2010-09-11 10:55:29
恩，我会做反转录。谢谢！非常感谢！

你好，请问你最后用什么方法合成的cDNA第二条连，买的试剂盒还是用上面的体系自己合成的，结果怎么样我现在也遇到了很一样的问题，等待回答
赞一下 回复此楼
6楼2014-11-13 13:07:55
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 clbb1030 的主题更新
61/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[公派出国] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +3 s3fFTmArrBt6 2026-09-14 3/150 2026-09-15 07:14 by C79jjtjAKjEn
[考博] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +6 s3fFTmArrBt6 2026-09-14 6/300 2026-09-15 07:14 by C79jjtjAKjEn
[教师之家] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +4 s3fFTmArrBt6 2026-09-13 4/200 2026-09-15 06:50 by 5BDX0d0WFp7t
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 3n8v2C8RimXI 2026-09-13 4/200 2026-09-15 05:50 by 5BDX0d0WFp7t
[博后之家] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +6 3n8v2C8RimXI 2026-09-13 6/300 2026-09-15 05:50 by 5BDX0d0WFp7t
[教师之家] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +6 3n8v2C8RimXI 2026-09-13 6/300 2026-09-15 05:38 by 5BDX0d0WFp7t
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +5 3n8v2C8RimXI 2026-09-13 6/300 2026-09-15 05:38 by 5BDX0d0WFp7t
[考博] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +5 3n8v2C8RimXI 2026-09-13 5/250 2026-09-15 05:34 by 5BDX0d0WFp7t
[找工作] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +6 QUjhNVAcOSff 2026-09-13 7/350 2026-09-15 05:22 by 5BDX0d0WFp7t
[博后之家] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +5 QUjhNVAcOSff 2026-09-13 6/300 2026-09-15 05:01 by mibUvS8DDCwf
[教师之家] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +3 6F5UbRU2I5hL 2026-09-14 3/150 2026-09-15 00:12 by vZfe6xYu34yj
[硕博家园] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +3 s3fFTmArrBt6 2026-09-13 5/250 2026-09-14 23:13 by vZfe6xYu34yj
[硕博家园] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +3 s3fFTmArrBt6 2026-09-13 5/250 2026-09-14 22:45 by vZfe6xYu34yj
[考研] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +5 LwdutQ8HoqWP 2026-09-13 5/250 2026-09-14 22:25 by vZfe6xYu34yj
[找工作] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +5 3n8v2C8RimXI 2026-09-13 5/250 2026-09-14 22:13 by vZfe6xYu34yj
[考博] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +5 QUjhNVAcOSff 2026-09-13 5/250 2026-09-14 21:36 by vZfe6xYu34yj
[找工作] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +3 QUjhNVAcOSff 2026-09-13 5/250 2026-09-14 21:25 by vZfe6xYu34yj
[考博] 上海工程技术大学激光智能制造课题组招收博士研究生 +4 两三岁ss 2026-09-14 4/200 2026-09-14 20:29 by 班主任的同桌
[考博] 西北工业大学材料学院电化学传感与催化课题组招收2027年推免研究生、博士生、博士后 +3 马方园 2026-09-10 4/200 2026-09-14 09:29 by Chem张zz
[考博] 27秋季材料博士申请求助 10+3 Cahal1 2026-09-11 4/200 2026-09-14 08:50 by 北京莱茵编辑
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭