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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » [求助]cDNA的纯化方式
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30937747

木虫 (小有名气)

[求助] [求助]cDNA的纯化方式

请问cDNA有哪些纯化方式?除了试剂盒以外的.谢谢
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我依旧会努力.
1楼 2011-06-05 16:29:20
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cellline

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
rainwander(金币+3): 鼓励交流 2011-06-05 23:07:42
rainwander(EPI+1): 2011-06-05 23:07:54
30937747(金币+3): 我现在就是无法确定cDNA是单链，是否也能用无水乙醇和异丙醇沉淀。请问你能确定这样做可行吗？ 2011-06-07 07:21:40
不知楼主的cDNA是否是蛋白或盐过多，一般这种情况下，除了使用市面上销售的纯化试剂盒外，最常用的方法就是一些经典的方法：
如，如果是混有蛋白，一般是用苯酚氯仿抽提后，在用纯的无水乙醇沉淀，最后用75%的乙醇清洗2次，用TE液或去离子水溶解后保存备用。
若果是含盐多的话，就可以省去苯酚抽提那一步，直接先用在用纯的无水乙醇沉淀，最后用75%的乙醇清洗2次，用TE液或去离子水溶解后保存备用。
主要在离心沉淀后，用水溶解时，不能只关心管底的那一小部分，还要记住在离心管的管壁上会粘很多样品，否则，你会损失很大cDNA.
Bless you！
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2楼2011-06-05 22:22:47
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cellline

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
rainwander(金币+2): 鼓励交流 2011-06-07 22:39:41
30937747(金币+3): 不需要充分振荡混匀吗?我一般都是振荡混匀后马上离心回收 2011-06-08 23:11:26
"我现在就是无法确定cDNA是单链，是否也能用无水乙醇和异丙醇沉淀。请问你能确定这样做可行吗？"

不知楼主是否做过RNA病毒的提取，我以前提取单链RNA病毒的基因组（如，AIV ,APMV,Flavivirus）时，就是用异丙醇沉淀的，而且就是放在室温20-30min，就离心回收，一直是这样做。
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3楼2011-06-07 21:23:07
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cellline

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

30937747(金币+4): 额.谢谢.受教了 2011-06-10 16:25:53
“ 不需要充分振荡混匀吗?我一般都是振荡混匀后马上离心回收”
一般不这么折腾，物理机械力对核酸链的损伤比较大，以前做学生的时候，老师都跟我们调侃说做分子生物学就像是跟女朋友谈恋爱，要温柔体贴，呵呵
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4楼2011-06-09 10:26:24
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cellline

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

沉淀的话会增加核酸回收的量
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5楼2011-06-09 10:27:29
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