应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 设计带histag的引物
51/1返回列表
查看: 3172  |  回复: 8
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

xxyysong

新虫 (初入文坛)

[求助] 设计带histag的引物 已有3人参与

各位师兄师姐， 我要给李斯特菌的一段目的基因带上N-terminal的histag再转到一个质粒里。我设计的引物是Forward: GGC+酶切位点+目的基因
Reverse：GGC+酶切位点+histag序列+目的基因。

我的问题是需要在引物里设计起始密码子和终止密码子吗？histag的序列CAT CAC都可以吗？还需要添加一些保护的序列吗？还有就是我找不到我要转入的质粒的序列图，只知道酶切位点。

谢谢！
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2015-04-08 00:27:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xxyysong

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
5楼: Originally posted by nemo88 at 2015-04-08 09:54:38
Histag不用保护碱基，但是你酶切位点的保护碱基要查清楚，都是三个吗，可以对一下酶切保护碱基表，我一般稳妥加6个
要去掉你目的基因上的终止密码子，然后在histag和酶切位点之间加终止密码子
不用知道质粒序列， ...

我还有一个问题 怎样去掉终止密码子呀 谢谢
赞一下 回复此楼
7楼2015-04-09 02:39:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 9 个回答

潇潇杨雨125

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
要看你的目的是什么了？过表达吗？

[ 发自小木虫客户端 ]
赞一下 回复此楼
2楼2015-04-08 00:54:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xxyysong

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 潇潇杨雨125 at 2015-04-08 00:54:01
要看你的目的是什么了？过表达吗？

就是表达目的蛋白在质粒里。 加histag是为了能过Ni-NTA柱子纯化。
赞一下 回复此楼
3楼2015-04-08 01:32:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lxzk

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2015-04-08 09:32:19
xxyysong: 金币+3, ★★★很有帮助, 谢谢 2015-04-09 01:23:04
有his的那侧要加起始／终止密码子，取代原来基因上的，另外一侧不用加，就用原来的。his密码子都可以，其它就按你设计的，不用额外的保护碱基了。

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
赞一下 回复此楼
4楼2015-04-08 06:18:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 9 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 071000生物学调剂求助 +17 zzzzwww 2026-04-09 20/1000 2026-04-10 15:55 by 求调剂zz
[考研] 291 求调剂 +26 化工2026届毕业� 2026-04-09 26/1300 2026-04-10 15:24 by MOF_Catal
[考研] 一志愿西交机械专硕求调剂 +8 求上岸的小王 2026-04-10 8/400 2026-04-10 15:09 by hemengdong
[考研] 298求调剂 +8 钉叮咚冬瓜 2026-04-07 10/500 2026-04-10 11:25 by 高维春
[考研] 已调剂 +18 柴郡猫_ 2026-04-09 19/950 2026-04-09 22:10 by 柴郡猫_
[考研] 生物学调剂，一志愿西南大学348，Top期刊一区二作、二区三作，三等奖学金三次 +4 candyyyi 2026-04-09 4/200 2026-04-09 18:39 by l_paradox
[考研] 312求调剂 +3 李鸿飞飞 2026-04-06 3/150 2026-04-09 17:32 by wp06
[考研] 0703化学调剂325分 +13 15771691647 2026-04-04 15/750 2026-04-09 16:55 by 15771691647
[考研] 0860004 求调剂 309分 +7 Yin DY 2026-04-08 7/350 2026-04-09 14:06 by ditto77778
[考研] 材料专硕322 +14 哈哈哈吼吼吼哈 2026-04-05 14/700 2026-04-09 13:25 by 5268321
[考研] 334求调剂 +16 Riot2025 2026-04-08 17/850 2026-04-09 09:28 by wdyheheeh
[考研] 求调剂 +13 柒luck 2026-04-07 13/650 2026-04-08 22:46 by 猪会飞
[考研] 材料专硕(0856) 339分求调剂 +16 哈哈哈鹅哈哈哈 2026-04-05 16/800 2026-04-08 16:02 by luoyongfeng
[考研] 274求调剂求调剂 +10 Jachenbingoo 2026-04-06 13/650 2026-04-08 14:25 by zhq0425
[考研] 323求调剂 +3 林zlu 2026-04-07 4/200 2026-04-07 23:21 by lbsjt
[考研] 11408 325分 +3 jgtxuxgkx 2026-04-07 3/150 2026-04-07 23:10 by lbsjt
[论文投稿] Decision: Revise for Editor还会送审吗 100+3 CccccccccFD 2026-04-04 5/250 2026-04-07 10:58 by 北京莱茵润色
[考研] 一志愿北京交通大学材料工程总分358求调剂 +4 cs0106 2026-04-04 4/200 2026-04-05 18:46 by imissbao
[考研] 295求调剂 +4 A你好研究生 2026-04-04 5/250 2026-04-04 22:46 by yu221
[考研] 求调剂 +3 农业工程与信息� 2026-04-04 3/150 2026-04-04 12:19 by 舍而后得
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭