应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 设计带histag的引物
91/1返回列表
查看: 3285  |  回复: 8
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

xxyysong

新虫 (初入文坛)

[求助] 设计带histag的引物 已有3人参与

各位师兄师姐， 我要给李斯特菌的一段目的基因带上N-terminal的histag再转到一个质粒里。我设计的引物是Forward: GGC+酶切位点+目的基因
Reverse：GGC+酶切位点+histag序列+目的基因。

我的问题是需要在引物里设计起始密码子和终止密码子吗？histag的序列CAT CAC都可以吗？还需要添加一些保护的序列吗？还有就是我找不到我要转入的质粒的序列图，只知道酶切位点。

谢谢！
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2015-04-08 00:27:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

潇潇杨雨125

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
要看你的目的是什么了？过表达吗？

[ 发自小木虫客户端 ]
赞一下 回复此楼
2楼2015-04-08 00:54:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xxyysong

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 潇潇杨雨125 at 2015-04-08 00:54:01
要看你的目的是什么了？过表达吗？

就是表达目的蛋白在质粒里。 加histag是为了能过Ni-NTA柱子纯化。
赞一下 回复此楼
3楼2015-04-08 01:32:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lxzk

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2015-04-08 09:32:19
xxyysong: 金币+3, ★★★很有帮助, 谢谢 2015-04-09 01:23:04
有his的那侧要加起始／终止密码子，取代原来基因上的，另外一侧不用加，就用原来的。his密码子都可以，其它就按你设计的，不用额外的保护碱基了。

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
赞一下 回复此楼
4楼2015-04-08 06:18:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

nemo88

禁虫 (小有名气)
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2015-04-08 23:08:42
xxyysong: 金币+7, ★★★★★最佳答案, 谢谢 2015-04-09 01:23:20
本帖内容被屏蔽
5楼2015-04-08 09:54:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xxyysong

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
5楼: Originally posted by nemo88 at 2015-04-08 09:54:38
Histag不用保护碱基，但是你酶切位点的保护碱基要查清楚，都是三个吗，可以对一下酶切保护碱基表，我一般稳妥加6个
要去掉你目的基因上的终止密码子，然后在histag和酶切位点之间加终止密码子
不用知道质粒序列， ...

起始密码子也需要加吗 谢谢
赞一下 回复此楼
6楼2015-04-09 01:26:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xxyysong

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
5楼: Originally posted by nemo88 at 2015-04-08 09:54:38
Histag不用保护碱基，但是你酶切位点的保护碱基要查清楚，都是三个吗，可以对一下酶切保护碱基表，我一般稳妥加6个
要去掉你目的基因上的终止密码子，然后在histag和酶切位点之间加终止密码子
不用知道质粒序列， ...

我还有一个问题 怎样去掉终止密码子呀 谢谢
赞一下 回复此楼
7楼2015-04-09 02:39:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ladtalent

至尊木虫 (著名写手)
引用回帖:
7楼: Originally posted by xxyysong at 2015-04-09 02:39:19
我还有一个问题 怎样去掉终止密码子呀 谢谢...

overlap PCR 去掉就可以了  如果histag不长直接设计带histag的primerPCR就好了
赞一下 回复此楼
8楼2015-04-09 12:54:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

nemo88

禁虫 (小有名气)
本帖内容被屏蔽
9楼2015-04-16 17:07:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 xxyysong 的主题更新
91/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 基金中了 +15 laoda193707 2026-08-06 15/750 2026-08-11 00:11 by jiafei2190
[基金申请] FileCode能看出啥？ +7 要乐观耀哥 2026-08-10 15/750 2026-08-10 19:29 by 要乐观耀哥
[基金申请] 综述论文作为代表作会不会影响评审专家的印象分？ +10 yufeiwaner 2026-08-09 11/550 2026-08-10 18:47 by yufeiwaner
[基金申请] 我的国基提前知道中了，可是同事的操作让我实在接受不了，怎么会有这样的人 +8 家与远方 2026-08-10 11/550 2026-08-10 17:09 by 六两废铜
[基金申请] 国自然结果 +4 Vierhys 2026-08-10 8/400 2026-08-10 15:06 by Vierhys
[基金申请] 应该是93bebmhtak前后十一个字符比较关键 +14 Lanmanbaby 2026-08-09 22/1100 2026-08-10 14:57 by wwncly
[基金申请] 8月时间戳变的，举个手。玩一下，释放压力 +11 archvillain 2026-08-04 13/650 2026-08-10 14:41 by seekfind
[基金申请] 据悉今年马上要出结果了 +7 瞬息宇宙 2026-08-10 8/400 2026-08-10 12:42 by Vivilian
[基金申请] 2026国自然放榜时间 +9 布布和一二 2026-08-08 9/450 2026-08-10 11:22 by xxxx2020
[基金申请] 这样的filecode谁见过 +11 布布和一二 2026-08-08 22/1100 2026-08-10 11:10 by wmfsnow
[基金申请] 面上项目filecode邪修 +5 西山十月 2026-08-09 7/350 2026-08-10 07:32 by 仁砚薪传
[基金申请] filecode与中标关系的预测 +5 布布和一二 2026-08-07 5/250 2026-08-09 16:15 by 袁向阳007
[基金申请] 关于filecode，很负责任的告诉大家 +6 爱看书的可乐 2026-08-08 7/350 2026-08-08 22:13 by a_niu
[基金申请] 化学口download_prp&fileCode的固定段好像这几天一直没变，有变的大神么？ +3 Tide man 2026-08-07 4/200 2026-08-07 22:39 by Tide man
[基金申请] 固定端突然变了，今天 +6 archvillain 2026-08-06 10/500 2026-08-07 16:03 by 医学老男孩
[基金申请] filecode变化情况 +6 布布和一二 2026-08-07 22/1100 2026-08-07 14:45 by 且听虎啸
[基金申请] filecode +14 等待解的谜 2026-08-06 19/950 2026-08-07 12:20 by wlwhappy
[基金申请] 求各位大神看下 100+6 hpkpkpkp 2026-08-05 33/1650 2026-08-06 14:49 by zhiyanjiang
[基金申请] 影响面上的因素 +8 布布和一二 2026-08-05 11/550 2026-08-06 10:41 by 宝贝虫子
[基金申请] 有没有H口的？有收到消息的吗？ +3 超级海虾 2026-08-04 3/150 2026-08-04 17:26 by 学教育滴
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭