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SDS-PAGE图求分析 已有6人参与
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图中是放线菌菌体破碎上清的SDS-PAGE图，样品最终是用来跑双向的，所以为了减少蛋白降解提高蛋白溶出率，用了不同的细胞裂解方法和几种不同的裂解液，结果如图所示。 A/B/C/D所用裂解液：Tris-HCl 50mM pH7.4, protease inhibitor cocktail E:Tris-HCl 50mM pH7.4, protease inhibitor cocktail, 8M 尿素 F：Tris-HCl 50mM pH7.4, protease inhibitor cocktail， 7M尿素，2M硫脲 G：Tris-HCl 50mM pH7.4, protease inhibitor cocktail，2%SDS（终浓度，SDS细胞破碎后加，65℃处理10min） 细胞破碎方法：A涡旋振荡，B超声，CDEFG机械均质 想请教高手几个问题 1、用SDS处理后的样品蛋白胶为什么会跑成这样？上面大分子量的蛋白全没了，下面糊成一片？做过不加SDS进行65℃处理，虽然蛋白有一定程度降解，但大分子量的蛋白条带还是有的，说明不是高温造成的结果。不知道样品中过量的SDS对跑胶有没有什么影响？ 2、尿素和硫脲对SDS-PAGE是不是也有影响？因为加了尿素和硫脲的样品蛋白胶颜色反而不如不加的，但是蛋白浓度测定（Bradford法和BCA法都测过）结果显示加了尿素和硫脲的蛋白浓度较高，是不是尿素和硫脲对Bradford法和BCA法都有干扰（硫脲对BCA有干扰是确定的）？ 3、蛋白胶每次跑出来下面小分子量部分都没有清晰的条带，而是糊成一片的，这是什么原因？  IMG_0578_副本.jpg |
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