应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 长片段连接，连接不上，求指导
51/1返回列表
查看: 3619  |  回复: 9
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

萧峰寒水

铜虫 (初入文坛)

[求助] 长片段连接，连接不上，求指导 已有4人参与

目的片段大约3000bp，载体全长9342bp，酶切位点基本是在MCS的两头，距离挺远。分别用solution 1和T4 连接酶都试过了，载体和片段的摩尔比也调过。但是涂板后，不是不长，就是张的少。用加酶切位点的引物检测只有引物二聚体，到底是怎么回事？
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2015-04-06 11:10:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

萧峰寒水

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by dehong1573 at 2015-04-07 08:10:26
很明显不是连接转化的问题啊，因为就算是原始质粒PCR产物也不应该是二聚体，应该有小片段的产物，所以首先要做的是调整你的PCR！

难道要改变退火温度
赞一下 回复此楼
9楼2015-04-25 14:36:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 10 个回答

萧峰寒水

铜虫 (初入文坛)
救命啊，要疯了
回复此楼
2楼2015-04-06 11:14:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

随风飘摇11

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
说的太笼统了，不好给你分析原因。你确定是连接的原因，不是酶切的原因？最好把体系，电泳图放上来

[ 发自小木虫客户端 ]
赞一下 回复此楼
天道酬勤
3楼2015-04-06 16:11:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

dehong1573

至尊木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2015-04-27 11:23:39
很明显不是连接转化的问题啊，因为就算是原始质粒PCR产物也不应该是二聚体，应该有小片段的产物，所以首先要做的是调整你的PCR！
赞一下 回复此楼
科学永无止境,只有合作共享才能更好地……
4楼2015-04-07 08:10:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 10 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭