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winnerzhi

金虫 (正式写手)

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[求助] 关于常规聚丙烯酰胺凝胶电泳样品的处理已有4人参与

我想用常规聚丙烯酰胺凝胶电泳检测一种菌所产的胞外酶，将液体培养基离心，浓缩，透析后按照郭尧君那本蛋白质电泳技术中样品处理的方法，配制样品缓冲液，发现加进样后根本看不到溴酚蓝的颜色，请问液体样品在点用前应该怎样处理？

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那么多的未知构成了美妙的人生

1楼 2015-03-30 21:43:54

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胡程

银虫 (小有名气)

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引用回帖:

7楼: Originally posted by winnerzhi at 2015-03-31 10:24:25
溴酚蓝的量是不是需要实验确定的？...

咱们做的不同，我做的是转化后的（大肠杆菌，仅做参考）一般是3毫升菌液离心后加入20微升5*上样缓冲液和160微升PBS，煮沸6分钟，离心取上清。上样缓冲液配方是：0.6毫升的1MTris-Hcl（PH6.8），5毫升50%的甘油（甘油：水=1:1），2毫升10%的SDS，去离子水稀释至10毫升，分装成500微升每管。临用前加入（1管）25微升β-巯基乙醇即可。