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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 蛋白电泳/WB » 关于常规聚丙烯酰胺凝胶电泳样品的处理
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winnerzhi

金虫 (正式写手)

[求助] 关于常规聚丙烯酰胺凝胶电泳样品的处理 已有4人参与

我想用常规聚丙烯酰胺凝胶电泳检测一种菌所产的胞外酶，将液体培养基离心，浓缩，透析后按照郭尧君那本蛋白质电泳技术中样品处理的方法，配制样品缓冲液，发现加进样后根本看不到溴酚蓝的颜色，请问液体样品在点用前应该怎样处理？
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那么多的未知构成了美妙的人生
1楼 2015-03-30 21:43:54
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halfbeer

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这是啥？

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winnerzhi: 金币+2 2015-03-31 10:23:10
我做的时候需要把样品沸水浴3分钟，12000r/min离心一分钟，点样的时候吸取上清液

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现在我们能做的就是努力努力再努力
2楼2015-03-31 07:57:04
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halfbeer

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这是啥？

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★ ★ ★ ★
winnerzhi: 金币+4 2015-03-31 10:23:58
你是加样之后就看不到吗？我用的是2*上样你如果还是不行，就用5*的试试

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3楼2015-03-31 08:00:49
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胡程

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

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winnerzhi: 金币+4 2015-03-31 10:24:29
我们用的 是5*上样缓冲液，如果样品浓度过高用PBS稀释的
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做最好的自己
4楼2015-03-31 08:43:41
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winnerzhi

金虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by halfbeer at 2015-03-31 07:57:04
我做的时候需要把样品沸水浴3分钟，12000r/min离心一分钟，点样的时候吸取上清液

那蛋白质岂不是变性了
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那么多的未知构成了美妙的人生
5楼2015-03-31 10:22:19
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winnerzhi

金虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by halfbeer at 2015-03-31 08:00:49
你是加样之后就看不到吗？我用的是2*上样你如果还是不行，就用5*的试试

对啊，单用缓冲液加进去也看不到颜色
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那么多的未知构成了美妙的人生
6楼2015-03-31 10:23:51
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winnerzhi

金虫 (正式写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 胡程 at 2015-03-31 08:43:41
我们用的 是5*上样缓冲液，如果样品浓度过高用PBS稀释的

溴酚蓝的量是不是需要实验确定的？
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那么多的未知构成了美妙的人生
7楼2015-03-31 10:24:25
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胡程

银虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by winnerzhi at 2015-03-31 10:24:25
溴酚蓝的量是不是需要实验确定的？...

咱们做的不同，我做的是转化后的（大肠杆菌，仅做参考）  一般是3毫升菌液离心后加入20微升5*上样缓冲液和160微升PBS，煮沸6分钟，离心取上清。上样缓冲液配方是：0.6毫升的1MTris-Hcl（PH6.8），5毫升50%的甘油（甘油：水=1:1），2毫升10%的SDS，去离子水稀释至10毫升，分装成500微升每管。临用前加入（1管）25微升β-巯基乙醇即可。
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做最好的自己
8楼2015-03-31 13:58:28
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winnerzhi

金虫 (正式写手)
引用回帖:
8楼: Originally posted by 胡程 at 2015-03-31 13:58:28
咱们做的不同，我做的是转化后的（大肠杆菌，仅做参考）  一般是3毫升菌液离心后加入20微升5*上样缓冲液和160微升PBS，煮沸6分钟，离心取上清。上样缓冲液配方是：0.6毫升的1MTris-Hcl（PH6.8），5毫升50%的甘油（ ...

哦...你做的是SDS-PAGE，我做的是常规的PAGE
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那么多的未知构成了美妙的人生
9楼2015-03-31 14:14:18
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halfbeer

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6楼: Originally posted by winnerzhi at 2015-03-31 10:23:51
对啊，单用缓冲液加进去也看不到颜色...

不可能，起码是蓝色

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现在我们能做的就是努力努力再努力
10楼2015-03-31 22:09:51
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