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winnerzhi

金虫 (正式写手)

[求助] 关于常规聚丙烯酰胺凝胶电泳样品的处理 已有4人参与

我想用常规聚丙烯酰胺凝胶电泳检测一种菌所产的胞外酶,将液体培养基离心,浓缩,透析后按照郭尧君那本蛋白质电泳技术中样品处理的方法,配制样品缓冲液,发现加进样后根本看不到溴酚蓝的颜色,请问液体样品在点用前应该怎样处理?
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那么多的未知构成了美妙的人生
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halfbeer

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这是啥?

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winnerzhi: 金币+2 2015-03-31 10:23:10
我做的时候需要把样品沸水浴3分钟,12000r/min离心一分钟,点样的时候吸取上清液

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现在我们能做的就是努力努力再努力
2楼2015-03-31 07:57:04
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halfbeer

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winnerzhi: 金币+4 2015-03-31 10:23:58
你是加样之后就看不到吗?我用的是2*上样你如果还是不行,就用5*的试试

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现在我们能做的就是努力努力再努力
3楼2015-03-31 08:00:49
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胡程

银虫 (小有名气)

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winnerzhi: 金币+4 2015-03-31 10:24:29
我们用的 是5*上样缓冲液,如果样品浓度过高用PBS稀释的
做最好的自己
4楼2015-03-31 08:43:41
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winnerzhi

金虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by halfbeer at 2015-03-31 07:57:04
我做的时候需要把样品沸水浴3分钟,12000r/min离心一分钟,点样的时候吸取上清液

那蛋白质岂不是变性了
那么多的未知构成了美妙的人生
5楼2015-03-31 10:22:19
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winnerzhi

金虫 (正式写手)

引用回帖:
3楼: Originally posted by halfbeer at 2015-03-31 08:00:49
你是加样之后就看不到吗?我用的是2*上样你如果还是不行,就用5*的试试

对啊,单用缓冲液加进去也看不到颜色
那么多的未知构成了美妙的人生
6楼2015-03-31 10:23:51
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winnerzhi

金虫 (正式写手)

引用回帖:
4楼: Originally posted by 胡程 at 2015-03-31 08:43:41
我们用的 是5*上样缓冲液,如果样品浓度过高用PBS稀释的

溴酚蓝的量是不是需要实验确定的?
那么多的未知构成了美妙的人生
7楼2015-03-31 10:24:25
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胡程

银虫 (小有名气)

引用回帖:
7楼: Originally posted by winnerzhi at 2015-03-31 10:24:25
溴酚蓝的量是不是需要实验确定的?...

咱们做的不同,我做的是转化后的(大肠杆菌,仅做参考)  一般是3毫升菌液离心后加入20微升5*上样缓冲液和160微升PBS,煮沸6分钟,离心取上清。上样缓冲液配方是:0.6毫升的1MTris-Hcl(PH6.8),5毫升50%的甘油(甘油:水=1:1),2毫升10%的SDS,去离子水稀释至10毫升,分装成500微升每管。临用前加入(1管)25微升β-巯基乙醇即可。
做最好的自己
8楼2015-03-31 13:58:28
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winnerzhi

金虫 (正式写手)

引用回帖:
8楼: Originally posted by 胡程 at 2015-03-31 13:58:28
咱们做的不同,我做的是转化后的(大肠杆菌,仅做参考)  一般是3毫升菌液离心后加入20微升5*上样缓冲液和160微升PBS,煮沸6分钟,离心取上清。上样缓冲液配方是:0.6毫升的1MTris-Hcl(PH6.8),5毫升50%的甘油( ...

哦...你做的是SDS-PAGE,我做的是常规的PAGE
那么多的未知构成了美妙的人生
9楼2015-03-31 14:14:18
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halfbeer

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这是啥?

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引用回帖:
6楼: Originally posted by winnerzhi at 2015-03-31 10:23:51
对啊,单用缓冲液加进去也看不到颜色...

不可能,起码是蓝色

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现在我们能做的就是努力努力再努力
10楼2015-03-31 22:09:51
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