24小时热门版块排行榜    

查看: 1770  |  回复: 14

winnerzhi

金虫 (正式写手)

[求助] 关于常规聚丙烯酰胺凝胶电泳样品的处理 已有4人参与

我想用常规聚丙烯酰胺凝胶电泳检测一种菌所产的胞外酶,将液体培养基离心,浓缩,透析后按照郭尧君那本蛋白质电泳技术中样品处理的方法,配制样品缓冲液,发现加进样后根本看不到溴酚蓝的颜色,请问液体样品在点用前应该怎样处理?
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

那么多的未知构成了美妙的人生
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

halfbeer

捐助贵宾 (小有名气)

这是啥?

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
winnerzhi: 金币+2 2015-03-31 10:23:10
我做的时候需要把样品沸水浴3分钟,12000r/min离心一分钟,点样的时候吸取上清液

[ 发自小木虫客户端 ]
现在我们能做的就是努力努力再努力
2楼2015-03-31 07:57:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

halfbeer

捐助贵宾 (小有名气)

这是啥?

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
winnerzhi: 金币+4 2015-03-31 10:23:58
你是加样之后就看不到吗?我用的是2*上样你如果还是不行,就用5*的试试

[ 发自小木虫客户端 ]
现在我们能做的就是努力努力再努力
3楼2015-03-31 08:00:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

胡程

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
winnerzhi: 金币+4 2015-03-31 10:24:29
我们用的 是5*上样缓冲液,如果样品浓度过高用PBS稀释的
做最好的自己
4楼2015-03-31 08:43:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

winnerzhi

金虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by halfbeer at 2015-03-31 07:57:04
我做的时候需要把样品沸水浴3分钟,12000r/min离心一分钟,点样的时候吸取上清液

那蛋白质岂不是变性了
那么多的未知构成了美妙的人生
5楼2015-03-31 10:22:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

winnerzhi

金虫 (正式写手)

引用回帖:
3楼: Originally posted by halfbeer at 2015-03-31 08:00:49
你是加样之后就看不到吗?我用的是2*上样你如果还是不行,就用5*的试试

对啊,单用缓冲液加进去也看不到颜色
那么多的未知构成了美妙的人生
6楼2015-03-31 10:23:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

winnerzhi

金虫 (正式写手)

引用回帖:
4楼: Originally posted by 胡程 at 2015-03-31 08:43:41
我们用的 是5*上样缓冲液,如果样品浓度过高用PBS稀释的

溴酚蓝的量是不是需要实验确定的?
那么多的未知构成了美妙的人生
7楼2015-03-31 10:24:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

胡程

银虫 (小有名气)

引用回帖:
7楼: Originally posted by winnerzhi at 2015-03-31 10:24:25
溴酚蓝的量是不是需要实验确定的?...

咱们做的不同,我做的是转化后的(大肠杆菌,仅做参考)  一般是3毫升菌液离心后加入20微升5*上样缓冲液和160微升PBS,煮沸6分钟,离心取上清。上样缓冲液配方是:0.6毫升的1MTris-Hcl(PH6.8),5毫升50%的甘油(甘油:水=1:1),2毫升10%的SDS,去离子水稀释至10毫升,分装成500微升每管。临用前加入(1管)25微升β-巯基乙醇即可。
做最好的自己
8楼2015-03-31 13:58:28
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

winnerzhi

金虫 (正式写手)

引用回帖:
8楼: Originally posted by 胡程 at 2015-03-31 13:58:28
咱们做的不同,我做的是转化后的(大肠杆菌,仅做参考)  一般是3毫升菌液离心后加入20微升5*上样缓冲液和160微升PBS,煮沸6分钟,离心取上清。上样缓冲液配方是:0.6毫升的1MTris-Hcl(PH6.8),5毫升50%的甘油( ...

哦...你做的是SDS-PAGE,我做的是常规的PAGE
那么多的未知构成了美妙的人生
9楼2015-03-31 14:14:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

halfbeer

捐助贵宾 (小有名气)

这是啥?

【答案】应助回帖

引用回帖:
6楼: Originally posted by winnerzhi at 2015-03-31 10:23:51
对啊,单用缓冲液加进去也看不到颜色...

不可能,起码是蓝色

[ 发自小木虫客户端 ]
现在我们能做的就是努力努力再努力
10楼2015-03-31 22:09:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 winnerzhi 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 317求调剂 +5 申子申申 2026-03-19 10/500 2026-03-20 15:58 by 蔡诚
[基金申请] 学校已经提交到NSFC,还能修改吗? 40+4 babangida 2026-03-19 8/400 2026-03-20 15:58 by babero
[考博] 招收博士1-2人 +3 QGZDSYS 2026-03-18 3/150 2026-03-20 11:58 by 呱呱呱呱叫
[考研] 一志愿武汉理工材料工程专硕调剂 +7 Doleres 2026-03-19 7/350 2026-03-20 10:39 by EBSD
[考研] 能源材料化学课题组招收硕士研究生8-10名 +5 脱颖而出 2026-03-16 14/700 2026-03-20 09:30 by kkcoco25
[考研] 085410人工智能专硕317求调剂(0854都可以) +4 xbxudjdn 2026-03-18 4/200 2026-03-20 09:07 by 不168
[考研] 求调剂 +3 暗涌afhb 2026-03-16 3/150 2026-03-20 00:28 by 河南大学校友
[考研] 294求调剂材料与化工专硕 +14 陌の森林 2026-03-18 14/700 2026-03-19 22:38 by 学员8dgXkO
[考研] 梁成伟老师课题组欢迎你的加入 +9 一鸭鸭哟 2026-03-14 11/550 2026-03-19 17:22 by !本暗一次!
[考研] 321求调剂 +8 何润采123 2026-03-18 10/500 2026-03-19 16:46 by 何润采123
[考研] 一志愿 西北大学 ,070300化学学硕,总分287,双非一本,求调剂。 +3 晨昏线与星海 2026-03-19 3/150 2026-03-19 13:36 by houyaoxu
[考研] 085600材料与化工求调剂 +6 绪幸与子 2026-03-17 6/300 2026-03-19 13:27 by houyaoxu
[考研] 344求调剂 +6 knight344 2026-03-16 7/350 2026-03-18 20:13 by walc
[考研] 085601专硕,总分342求调剂,地区不限 +5 share_joy 2026-03-16 5/250 2026-03-18 14:48 by haxia
[考研] 材料专硕326求调剂 +6 墨煜姒莘 2026-03-15 7/350 2026-03-17 17:10 by ruiyingmiao
[考博] 26申博 +4 八6八68 2026-03-16 4/200 2026-03-17 13:00 by 轻松不少随
[考研] 304求调剂 +3 曼殊2266 2026-03-14 3/150 2026-03-16 16:39 by houyaoxu
[考研] 中科院材料273求调剂 +4 yzydy 2026-03-15 4/200 2026-03-16 15:59 by Gaodh_82
[考研] 求老师收留调剂 +4 jiang姜66 2026-03-14 5/250 2026-03-15 20:11 by Winj1e
[考研] 招收0805(材料)调剂 +3 18595523086 2026-03-13 3/150 2026-03-14 00:33 by 123%、
信息提示
请填处理意见