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Nagato

新虫 (初入文坛)

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[求助] WB分子量不对，条带不特异，求原因！已有1人参与

本人做WB，蛋白分子量大概是13kDa。一抗用的是自己做的兔抗多克隆抗体。提取组织蛋白做WB以后发现条带大小不对。有两条特异性条带一条在16kDa左右。一条在37kDa左右。本人的蛋白具有类似锌指蛋白的半胱氨酸-组氨酸拉链结构。一抗是用大肠杆菌原核表达后经过纯化注射兔子得到的，特异性感觉还好。不知道出现这种情况的原因是什么？跑的是10%sds的变性胶，上样缓冲液里面加了巯基乙醇。跪求指教啊！

20140130.jpg

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1楼 2015-03-30 15:03:14

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zhxian

新虫 (小有名气)

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引用回帖:

3楼: Originally posted by Nagato at 2015-03-31 09:41:04
谢谢，我在不同的组织中做过WB检测，条带单一但是大小偏大。抗体应该还好，不知道是否可能是锌指区域形成了二聚体结构导致的？蛋白的等电点为6.28

20150310ML血淋巴.jpg
...

楼主，解决了没有？我出现这种情况，我都不知道原因