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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 蛋白电泳/WB » WB分子量不对，条带不特异，求原因！
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Nagato

新虫 (初入文坛)

[求助] WB分子量不对，条带不特异，求原因！ 已有1人参与

本人做WB，蛋白分子量大概是13kDa。一抗用的是自己做的兔抗多克隆抗体。提取组织蛋白做WB以后发现条带大小不对。有两条特异性条带一条在16kDa左右。一条在37kDa左右。本人的蛋白具有类似锌指蛋白的半胱氨酸-组氨酸拉链结构。一抗是用大肠杆菌原核表达后经过纯化注射兔子得到的，特异性感觉还好。不知道出现这种情况的原因是什么？跑的是10%sds的变性胶，上样缓冲液里面加了巯基乙醇。跪求指教啊！

WB分子量不对，条带不特异，求原因！
20140130.jpg
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1楼 2015-03-30 15:03:14
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liuderong

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
可能是抗体特异性不好，多抗经常会碰到这种情况，可以试试单抗。
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2楼2015-03-30 20:18:38
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Nagato

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by liuderong at 2015-03-30 20:18:38
可能是抗体特异性不好，多抗经常会碰到这种情况，可以试试单抗。

谢谢，我在不同的组织中做过WB检测，条带单一但是大小偏大。抗体应该还好，不知道是否可能是锌指区域形成了二聚体结构导致的？蛋白的等电点为6.28
WB分子量不对，条带不特异，求原因！-1
20150310ML血淋巴.jpg
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3楼2015-03-31 09:41:04
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zhxian

新虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by Nagato at 2015-03-31 09:41:04
谢谢，我在不同的组织中做过WB检测，条带单一但是大小偏大。抗体应该还好，不知道是否可能是锌指区域形成了二聚体结构导致的？蛋白的等电点为6.28

20150310ML血淋巴.jpg
...

楼主，解决了没有？我出现这种情况，我都不知道原因
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4楼2018-12-21 21:33:09
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