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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » PCR产物跑胶出来大小是750BP左右，然后送去测序只有300多BP这是为啥
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qaz139687

新虫 (小有名气)

[求助] PCR产物跑胶出来大小是750BP左右，然后送去测序只有300多BP这是为啥已有3人参与

有大神知道原因吗
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1楼2015-03-28 16:32:32
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qaz139687

新虫 (小有名气)
测了2次都是只有300多bp的
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2楼2015-03-28 16:32:50
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书生的哥哥啊

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你确定你的marker没用错

[ 发自小木虫客户端 ]
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3楼2015-03-28 16:45:21
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qaz139687

新虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 书生的哥哥啊 at 2015-03-28 16:45:21
你确定你的marker没用错

没有呢 当时拍的时候一条700多一条300，公司也说是700多BP的 不知道为啥测出来是300多
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4楼2015-03-28 17:58:01
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墨尔本机器

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
送测时有发生的事情，你的750是菌落pcr验证还是pcr产物直接送测前的验证？两种情况下会有杂菌落污染或产物不纯的情况，都会导致你说的结果，建议重新挑菌或者纯化pcr产物之后再测序，小问题，再做一下，肯定没问题
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5楼2015-03-28 21:26:37
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SAM001

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
可能是你的引物与目标序列有多个结合位点，建议从新设计测序引物
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6楼2015-03-28 21:31:57
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qaz139687

新虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by SAM001 at 2015-03-28 21:31:57
可能是你的引物与目标序列有多个结合位点，建议从新设计测序引物

应该不是这个问题，因为引物是从头跟我的序列连接的，引物的位置没有错，就是不知道为啥只测了300BP就停止了
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7楼2015-03-28 22:16:16
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qaz139687

新虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by 墨尔本机器 at 2015-03-28 21:26:37
送测时有发生的事情，你的750是菌落pcr验证还是pcr产物直接送测前的验证？两种情况下会有杂菌落污染或产物不纯的情况，都会导致你说的结果，建议重新挑菌或者纯化pcr产物之后再测序，小问题，再做一下，肯定没问题

直接送的PCR产物，公司切胶纯化后说也是只有1条750BP的，他们也不知道为啥，只是让我重新PCR
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8楼2015-03-28 22:17:06
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SAM001

金虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by qaz139687 at 2015-03-28 22:16:16
应该不是这个问题，因为引物是从头跟我的序列连接的，引物的位置没有错，就是不知道为啥只测了300BP就停止了...

你在测序停止的地方再设计一条引物，看看吧
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9楼2015-03-28 23:43:38
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墨尔本机器

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
8楼: Originally posted by qaz139687 at 2015-03-28 22:17:06
直接送的PCR产物，公司切胶纯化后说也是只有1条750BP的，他们也不知道为啥，只是让我重新PCR...

他们既然说了750单挑带，结果这样也不解释，太不负责了，你还由着他们！
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10楼2015-03-30 08:34:28
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