| 查看: 1016 | 回复: 3 | |||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | |||
[交流]
求助RACE交流经验 已有3人参与
|
|||
| 各位大侠，我现在做3’和5‘race遇到了瓶颈，都说3’比5'好做，而我是哪个都做不出来，我是用兼并引物千辛万苦调的中间序列，按照invitrogen公司RACE试剂盒中的接头引物设计并合成的引物，分别是P1，P2，P3，P4 ，做3’race 用P1做逆转录，用P3和自己设计的一条上游特异性引物做 TouchDown PCR(普通PCR效果不如touchdown)，同时还设计了巢式引物，现在的结果是，PCR有条带，测序结果显示上下游引物正确且包含polyA尾，但是除了引物部分，剩下的序列就不是我想要的目的序列，我猜测是引物特异性差以及模板丰度低。5' 试过几回，用的是3‘端加C的方法，没有用试剂盒，都是自己买的酶，大部分是TAKARA的，PCR结果条带杂，且没有较为突出的亮带，内嵌结果也不理想，出现抹带。 眼瞅着就要毕业了，还在做序列，请各位同仁做的好的经验丰富的多多指教 |
回复此楼» 猜你喜欢
含氟糖皮质激素的外用抗炎利器醋酸氟轻松
已经有0人回复
-
阿莫奈韦（Amenamevir）：解旋酶-引物酶靶向分子的结构特征与合成路径全解析
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有181人回复
-
利瑞鲁单抗：靶向KIR的NK细胞检查点工具抗体，结构基础与科研应用全解析
已经有0人回复
-
Wnt-C59：PORCN靶向化学探针，Wnt信号通路阻断机制与科研应用全解析
已经有0人回复
-
Fexaramine：肠道限制性FXR化学探针，结构特征与信号通路研究全解析
已经有0人回复
-
NVS-STG2：靶向STING跨膜域的分子胶类激动剂，结构特征与寡聚化机制研究全解析
已经有0人回复
-
DOTA-GPC3肽（CAS 3066439-94-6）：双功能分子探针前体的结构特征与标记应用解析
已经有0人回复
-
科研用 TLR7/8 双激动剂怎么选？现货与质控要点
已经有0人回复
-
SEL120-34A HCl：CDK8/CDK19高选择性激酶抑制剂
已经有0人回复
» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 做RACE老是出现非特异扩增，求助！
已经有21人回复
- 求助怎么设计这样的引物
已经有19人回复
- 3‘s race PCR问题
已经有19人回复
- 紧急求助5‘RACE（测序结果问题）
已经有10人回复
- 16SDNA-PCR产物测序结果拿到后该如何处理？
已经有5人回复
- 关于takata公司的5‘RACE试剂盒中的引物设计
已经有13人回复
- 【求助/交流】关于SMARTer™ RACE cDNA Amplification 的求助....谢谢...
已经有14人回复
- 【求助/交流】如何对PCR测序产物进行分析？
已经有11人回复
- 【求助/交流】cDNA在进行同源扩增之后，不进行RACE还有那些方法得到全序列？
已经有8人回复
- 【求助/交流】3'RACE 结果有问题～～～
已经有8人回复
- 【求助/交流】5'RACE试剂盒的选择？
已经有9人回复
- 【求助/交流】RACE引物设计的要求
已经有6人回复
- 【求助/交流】关于RACE试剂盒的选择
已经有6人回复
- 【求助/交流】3'RACE问题
已经有9人回复
- 【求助/交流】5'Race反复做不出来，该怎么办
已经有74人回复
- 【求助/交流】用SMART技术得到一个基因的5‘ RACE后，是不是就知道该基因的转录起始位
已经有7人回复
- 【求助/交流】5-RACE问题
已经有14人回复
3楼2016-09-04 09:58:05
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
|
你好，我现在也是要克隆一个未知基因，需要先设计兼并引物，克隆中间片段，再利用race扩两段，但是现在我就是想问一下这个中间片段在基因中的位置有要求吗？ 发自小木虫Android客户端 |
2楼2016-03-04 08:40:51
jinnini125
木虫 (小有名气)
- 应助: 2 (幼儿园)
- 金币: 2065
- 散金: 237
- 红花: 3
- 帖子: 198
- 在线: 15.5小时
- 虫号: 4205938
- 注册: 2015-11-08
- 性别: MM
- 专业: 园艺作物采后生物学
4楼2016-09-07 09:54:03
