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求助RACE交流经验 已有3人参与
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| 各位大侠，我现在做3’和5‘race遇到了瓶颈，都说3’比5'好做，而我是哪个都做不出来，我是用兼并引物千辛万苦调的中间序列，按照invitrogen公司RACE试剂盒中的接头引物设计并合成的引物，分别是P1，P2，P3，P4 ，做3’race 用P1做逆转录，用P3和自己设计的一条上游特异性引物做 TouchDown PCR(普通PCR效果不如touchdown)，同时还设计了巢式引物，现在的结果是，PCR有条带，测序结果显示上下游引物正确且包含polyA尾，但是除了引物部分，剩下的序列就不是我想要的目的序列，我猜测是引物特异性差以及模板丰度低。5' 试过几回，用的是3‘端加C的方法，没有用试剂盒，都是自己买的酶，大部分是TAKARA的，PCR结果条带杂，且没有较为突出的亮带，内嵌结果也不理想，出现抹带。 眼瞅着就要毕业了，还在做序列，请各位同仁做的好的经验丰富的多多指教 |
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小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
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你好，我现在也是要克隆一个未知基因，需要先设计兼并引物，克隆中间片段，再利用race扩两段，但是现在我就是想问一下这个中间片段在基因中的位置有要求吗？ 发自小木虫Android客户端 |
2楼2016-03-04 08:40:51
3楼2016-09-04 09:58:05
jinnini125
木虫 (小有名气)
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- 专业: 园艺作物采后生物学
4楼2016-09-07 09:54:03