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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 蛋白电泳/WB » Western Blot中的问题
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yjhuan

银虫 (小有名气)

[求助] Western Blot中的问题 已有5人参与

跑蛋白时经常出现条带相连的情况，求大神帮忙解释一下问题出在哪里，还有第二个图是什么原因？胶的问题还是蛋白的问题

Western Blot中的问题
1.jpg


Western Blot中的问题-1
2.jpg
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1楼 2015-01-29 19:09:40
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

曼舞流苏

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
yjhuan: 金币+5, ★★★很有帮助 2015-03-24 18:32:33
也有可能是上样缓冲液的问题吧，放置时间久的话也会这样子的（特别是有沉淀析出的时候），换一下试试。
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8楼2015-03-23 14:49:27
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普通回帖

bluesea000

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2015-01-29 23:08:14
我以前也跑过这种图，图1可能是上样量太多，而且loading质量不太好，蛋白加完loading处理后13000rpm/min离心2-3min，再跑应该会好点。
图2应该是电泳液的问题，电泳和转膜液全部新配，试试看~
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» 本帖已获得的红花（最新10朵）

yjhuan
2楼2015-01-29 19:20:47
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logowang

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2015-01-29 23:08:36
适当的降低电压，有条件的话在 4 度冷柜里跑， 没条件的话把整个电泳盒放在大冰盒里跑， 问题是在跑胶 和后续的wb实验关系不大， 先摸索跑胶条件吧。
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» 本帖已获得的红花（最新10朵）

yjhuan
3楼2015-01-29 19:20:52
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yjhuan

银虫 (小有名气)
送红花一朵
引用回帖:
2楼: Originally posted by bluesea000 at 2015-01-29 19:20:47
我以前也跑过这种图，图1可能是上样量太多，而且loading质量不太好，蛋白加完loading处理后13000rpm/min离心2-3min，再跑应该会好点。
图2应该是电泳液的问题，电泳和转膜液全部新配，试试看~

谢谢

[ 发自小木虫客户端 ]
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4楼2015-01-29 21:54:42
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yjhuan

银虫 (小有名气)
送红花一朵
引用回帖:
3楼: Originally posted by logowang at 2015-01-29 19:20:52
适当的降低电压，有条件的话在 4 度冷柜里跑， 没条件的话把整个电泳盒放在大冰盒里跑， 问题是在跑胶 和后续的wb实验关系不大， 先摸索跑胶条件吧。

嗯嗯，我试试，谢谢啦

[ 发自小木虫客户端 ]
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5楼2015-01-29 21:55:11
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maila
6楼2015-01-30 08:06:43
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13227213581

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

你这绝对是上样上的有问题，肯定是上样的时候堵孔了，结果跑成一条线
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justbesunshine
7楼2015-02-02 22:01:19
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lidong.0107

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
yjhuan: 金币+5, ★★★很有帮助 2015-03-24 18:32:20
图1是蛋白的问题，有的蛋白就是有其他的条带，也有可能是显影的问题，压得时间短点其他带就没有了，图2是胶的问题，胶没有制匀
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9楼2015-03-24 17:04:24
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yjhuan

银虫 (小有名气)
内容已删除
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10楼2015-03-24 18:33:51
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