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yjhuan

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[求助] Western Blot中的问题已有5人参与

跑蛋白时经常出现条带相连的情况，求大神帮忙解释一下问题出在哪里，还有第二个图是什么原因？胶的问题还是蛋白的问题

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1楼 2015-01-29 19:09:40

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【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
yjhuan: 金币+5, ★★★很有帮助 2015-03-24 18:32:33

也有可能是上样缓冲液的问题吧，放置时间久的话也会这样子的（特别是有沉淀析出的时候），换一下试试。

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8楼2015-03-23 14:49:27

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bluesea000

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【答案】应助回帖

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西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2015-01-29 23:08:14

我以前也跑过这种图，图1可能是上样量太多，而且loading质量不太好，蛋白加完loading处理后13000rpm/min离心2-3min，再跑应该会好点。
图2应该是电泳液的问题，电泳和转膜液全部新配，试试看~

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yjhuan

2楼2015-01-29 19:20:47

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logowang

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【答案】应助回帖

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西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2015-01-29 23:08:36

适当的降低电压，有条件的话在 4 度冷柜里跑，没条件的话把整个电泳盒放在大冰盒里跑，问题是在跑胶和后续的wb实验关系不大，先摸索跑胶条件吧。

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yjhuan

3楼2015-01-29 19:20:52

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引用回帖:

2楼: Originally posted by bluesea000 at 2015-01-29 19:20:47
我以前也跑过这种图，图1可能是上样量太多，而且loading质量不太好，蛋白加完loading处理后13000rpm/min离心2-3min，再跑应该会好点。
图2应该是电泳液的问题，电泳和转膜液全部新配，试试看~

谢谢

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4楼2015-01-29 21:54:42

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