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yjhuan

银虫 (小有名气)

[求助] Western Blot中的问题 已有5人参与

跑蛋白时经常出现条带相连的情况,求大神帮忙解释一下问题出在哪里,还有第二个图是什么原因?胶的问题还是蛋白的问题

Western Blot中的问题
1.jpg


Western Blot中的问题-1
2.jpg
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曼舞流苏

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
yjhuan: 金币+5, ★★★很有帮助 2015-03-24 18:32:33
也有可能是上样缓冲液的问题吧,放置时间久的话也会这样子的(特别是有沉淀析出的时候),换一下试试。
8楼2015-03-23 14:49:27
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普通回帖

bluesea000

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2015-01-29 23:08:14
我以前也跑过这种图,图1可能是上样量太多,而且loading质量不太好,蛋白加完loading处理后13000rpm/min离心2-3min,再跑应该会好点。
图2应该是电泳液的问题,电泳和转膜液全部新配,试试看~

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

2楼2015-01-29 19:20:47
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logowang

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2015-01-29 23:08:36
适当的降低电压,有条件的话在 4 度冷柜里跑, 没条件的话把整个电泳盒放在大冰盒里跑, 问题是在跑胶 和后续的wb实验关系不大, 先摸索跑胶条件吧。

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

3楼2015-01-29 19:20:52
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yjhuan

银虫 (小有名气)

送红花一朵
引用回帖:
2楼: Originally posted by bluesea000 at 2015-01-29 19:20:47
我以前也跑过这种图,图1可能是上样量太多,而且loading质量不太好,蛋白加完loading处理后13000rpm/min离心2-3min,再跑应该会好点。
图2应该是电泳液的问题,电泳和转膜液全部新配,试试看~

谢谢

[ 发自小木虫客户端 ]
4楼2015-01-29 21:54:42
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yjhuan

银虫 (小有名气)

送红花一朵
引用回帖:
3楼: Originally posted by logowang at 2015-01-29 19:20:52
适当的降低电压,有条件的话在 4 度冷柜里跑, 没条件的话把整个电泳盒放在大冰盒里跑, 问题是在跑胶 和后续的wb实验关系不大, 先摸索跑胶条件吧。

嗯嗯,我试试,谢谢啦

[ 发自小木虫客户端 ]
5楼2015-01-29 21:55:11
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6楼2015-01-30 08:06:43
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13227213581

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

你这绝对是上样上的有问题,肯定是上样的时候堵孔了,结果跑成一条线
justbesunshine
7楼2015-02-02 22:01:19
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lidong.0107

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
yjhuan: 金币+5, ★★★很有帮助 2015-03-24 18:32:20
图1是蛋白的问题,有的蛋白就是有其他的条带,也有可能是显影的问题,压得时间短点其他带就没有了,图2是胶的问题,胶没有制匀
9楼2015-03-24 17:04:24
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yjhuan

银虫 (小有名气)

内容已删除
10楼2015-03-24 18:33:51
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