24小时热门版块排行榜    

查看: 1917  |  回复: 13

静待天享

金虫 (小有名气)

[求助] ELISA实验相关问题 已有6人参与

操作步骤:
(1)包被一抗(包被液:PH9.5碳酸盐缓冲液,抗体VEGF(1:1000),4℃过夜)
(2)PBS-T20洗三次
(3)10%小牛血清PBS溶液,室温下封闭2h
(4)PBS-T20洗三次
(5)加入样品,室温下孵育2h
  (6)PBS-T20洗五次
(7)二抗(10%小牛血清PBS溶液中加入兔的抗体按照1:2000)
(8)PBS-T20洗七次
(9)加入底物反应液,黑暗下半个小时
(10)加入中止液,测量
以上是我的操作步骤,结果无论是标准品还是样品值都差不多,没有梯度,而且加入底物反应液后溶液很快就变成蓝色,也没有梯度,加入中止液变成黄色,肉眼看都是一样大的,不知道问题出现在哪里????求大神帮忙解决!
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

lairena

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
加零浓度样本(样稀或者纯水)试试,或者在板上不加样本直接加酶标二抗试试,若也显色而且一样深的话,那可能是封闭不好。
http://www.qinms.com
3楼2015-01-30 09:18:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

董博士

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
可能是样品浓度过高,建议梯度稀释后重新进行实验
医学&统计学
2楼2015-01-29 23:15:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

feiyue122

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
楼主你用的是双抗夹心法吧,方便把数据列出来吗,这样方便看出是你的包被浓度过,还是什么问题
另外还有可能用的封闭液中小牛血清有可能会与二抗产生交叉反应的
4楼2015-01-30 09:18:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

静待天享

金虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by feiyue122 at 2015-01-30 09:18:21
楼主你用的是双抗夹心法吧,方便把数据列出来吗,这样方便看出是你的包被浓度过,还是什么问题
另外还有可能用的封闭液中小牛血清有可能会与二抗产生交叉反应的

3.0498        2.3973        1.7161        2.0521        2.1788        2.2616
3.0505        2.0326        2.2802        2.0995        2.1212        2.0881
2.8965        2.6971        1.9360        2.0162        2.2177        2.2882
3.1341        2.1370        2.0572        2.1376        2.1157        2.1072
2.7908        2.3040        1.7561        1.8150        2.0982        1.7051
2.8766        2.1876        1.9752        2.0478        1.9026        1.9232
2.8291        2.4246        2.2508        2.1376        2.1307        2.0451
3.1948        2.7461        2.4154        2.1896        2.5620        2.4389
横着三个是重复孔,竖着前七个是标准品,后面九个是样品,肿瘤血清
5楼2015-01-31 09:00:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

feiyue122

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

根据你的描述,好像,你的数据比较乱,你能把你标准品的浓度和你的OD值相对应起来吗?
6楼2015-02-02 11:54:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

寂静之林

银虫 (小有名气)

楼主解决问题没有?
7楼2015-02-28 12:15:07
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

amywang9761

木虫 (小有名气)

楼主,方便说出你的一抗和二抗分别是哪个宿主的吗?你包被的一抗,没有封闭掉未结合完的位点,如果可以和加入的二抗反应的话,就可能出现你说的结果
8楼2015-03-02 09:14:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yy122465518

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

看OD都这么高,可能是包被量过高导致,或者封闭不完全,建议将做下空白的样本,或者做下包被梯度,继续降低包被量。
9楼2015-03-03 11:41:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

静待天享

金虫 (小有名气)

引用回帖:
8楼: Originally posted by amywang9761 at 2015-03-02 09:14:37
楼主,方便说出你的一抗和二抗分别是哪个宿主的吗?你包被的一抗,没有封闭掉未结合完的位点,如果可以和加入的二抗反应的话,就可能出现你说的结果

一抗、二抗用的都是WB所用的抗体,正常做WB实验结果的数据都非常好的。
10楼2015-03-16 16:10:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 静待天享 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 什么时候开奖? +4 CrisMessi 2026-08-18 4/200 2026-08-19 00:53 by gatelove
[基金申请] 咱们一起用铁证分析2026国家社科基金中标与否 +7 启萌科技 2026-08-12 27/1350 2026-08-18 21:44 by Noways
[教师之家] 为什么余额宝的年化利率越来越低?主要原因有哪些? +3 瞬息宇宙 2026-08-15 3/150 2026-08-18 21:40 by xiaohuixin
[基金申请] 朋友圈看到的 +4 wangzilk 2026-08-18 5/250 2026-08-18 19:25 by wangzilk
[基金申请] 欢迎发来filecode的Mz6后的代码验证其规律 +51 医学老男孩 2026-08-13 110/5500 2026-08-18 19:07 by icerianxia
[基金申请] 时间戳变了,能看出什么问题? +8 基诺咪客 2026-08-17 11/550 2026-08-18 17:13 by 悠然熊猫
[基金申请] 重要消息,中午系统在维护 +9 yuleib84 2026-08-18 10/500 2026-08-18 16:52 by archvillain
[基金申请] 时间戳又变了8-15 +14 archvillain 2026-08-15 26/1300 2026-08-18 13:37 by phantomgost
[基金申请] 今天维护系统维护 祝所有人 高中 +8 gjjjzhong 2026-08-18 9/450 2026-08-18 13:01 by 家与远方
[基金申请] 哪位老哥知道今年的国自然具体哪一天放榜? +13 Ldrop2023 2026-08-13 16/800 2026-08-18 12:25 by 淀粉搬运工
[基金申请] 快农历七夕节了,轻松一下,男人悄悄话,女施主请不要进来。 +4 Tide man 2026-08-14 5/250 2026-08-18 11:35 by Tide man
[基金申请] 感觉是下周放榜了 +6 angus9576 2026-08-17 11/550 2026-08-17 23:57 by angus9576
[基金申请] filecode=后面第一个是大写字母 +8 wangze12014 2026-08-14 10/500 2026-08-17 17:05 by xter9665
[基金申请] 今天系统多次维护,明天很可能放榜! +8 zju2000 2026-08-16 9/450 2026-08-17 12:20 by lmz0216
[精细化工] 招聘 金属平磨液,抛光液研发工程师 +3 小天0311 2026-08-14 3/150 2026-08-16 07:31 by H9PLUS
[基金申请] 各位道友,我要去昆明玩几天,回来见。 +7 Tide man 2026-08-14 8/400 2026-08-15 01:11 by arzu_hma
[基金申请] 重要来源:本周末出结果 +10 瞬息宇宙 2026-08-12 10/500 2026-08-13 15:46 by likettle
[基金申请] 不应该看fileCode +7 且听虎啸 2026-08-12 9/450 2026-08-13 14:27 by flydreamws
[基金申请] Filecode 又变了,巨变 +3 WH3796 2026-08-12 4/200 2026-08-13 14:13 by 小木虫6752397
[基金申请] 结合人工智能,周易传统文化,filecode打分制来了,3分以上希望很大。 +3 Tide man 2026-08-12 4/200 2026-08-13 08:35 by ZJTJZ
信息提示
请填处理意见