24小时热门版块排行榜    

查看: 1616  |  回复: 13

静待天享

金虫 (小有名气)

[求助] ELISA实验相关问题 已有6人参与

操作步骤:
(1)包被一抗(包被液:PH9.5碳酸盐缓冲液,抗体VEGF(1:1000),4℃过夜)
(2)PBS-T20洗三次
(3)10%小牛血清PBS溶液,室温下封闭2h
(4)PBS-T20洗三次
(5)加入样品,室温下孵育2h
  (6)PBS-T20洗五次
(7)二抗(10%小牛血清PBS溶液中加入兔的抗体按照1:2000)
(8)PBS-T20洗七次
(9)加入底物反应液,黑暗下半个小时
(10)加入中止液,测量
以上是我的操作步骤,结果无论是标准品还是样品值都差不多,没有梯度,而且加入底物反应液后溶液很快就变成蓝色,也没有梯度,加入中止液变成黄色,肉眼看都是一样大的,不知道问题出现在哪里????求大神帮忙解决!
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

lairena

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
加零浓度样本(样稀或者纯水)试试,或者在板上不加样本直接加酶标二抗试试,若也显色而且一样深的话,那可能是封闭不好。
http://www.qinms.com
3楼2015-01-30 09:18:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

董博士

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
可能是样品浓度过高,建议梯度稀释后重新进行实验
医学&统计学
2楼2015-01-29 23:15:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

feiyue122

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
楼主你用的是双抗夹心法吧,方便把数据列出来吗,这样方便看出是你的包被浓度过,还是什么问题
另外还有可能用的封闭液中小牛血清有可能会与二抗产生交叉反应的
4楼2015-01-30 09:18:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

静待天享

金虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by feiyue122 at 2015-01-30 09:18:21
楼主你用的是双抗夹心法吧,方便把数据列出来吗,这样方便看出是你的包被浓度过,还是什么问题
另外还有可能用的封闭液中小牛血清有可能会与二抗产生交叉反应的

3.0498        2.3973        1.7161        2.0521        2.1788        2.2616
3.0505        2.0326        2.2802        2.0995        2.1212        2.0881
2.8965        2.6971        1.9360        2.0162        2.2177        2.2882
3.1341        2.1370        2.0572        2.1376        2.1157        2.1072
2.7908        2.3040        1.7561        1.8150        2.0982        1.7051
2.8766        2.1876        1.9752        2.0478        1.9026        1.9232
2.8291        2.4246        2.2508        2.1376        2.1307        2.0451
3.1948        2.7461        2.4154        2.1896        2.5620        2.4389
横着三个是重复孔,竖着前七个是标准品,后面九个是样品,肿瘤血清
5楼2015-01-31 09:00:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

feiyue122

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

根据你的描述,好像,你的数据比较乱,你能把你标准品的浓度和你的OD值相对应起来吗?
6楼2015-02-02 11:54:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

寂静之林

银虫 (小有名气)

楼主解决问题没有?
7楼2015-02-28 12:15:07
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

amywang9761

木虫 (小有名气)

楼主,方便说出你的一抗和二抗分别是哪个宿主的吗?你包被的一抗,没有封闭掉未结合完的位点,如果可以和加入的二抗反应的话,就可能出现你说的结果
8楼2015-03-02 09:14:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yy122465518

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

看OD都这么高,可能是包被量过高导致,或者封闭不完全,建议将做下空白的样本,或者做下包被梯度,继续降低包被量。
9楼2015-03-03 11:41:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

静待天享

金虫 (小有名气)

引用回帖:
8楼: Originally posted by amywang9761 at 2015-03-02 09:14:37
楼主,方便说出你的一抗和二抗分别是哪个宿主的吗?你包被的一抗,没有封闭掉未结合完的位点,如果可以和加入的二抗反应的话,就可能出现你说的结果

一抗、二抗用的都是WB所用的抗体,正常做WB实验结果的数据都非常好的。
10楼2015-03-16 16:10:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 静待天享 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 材料与化工考研调剂 +3 孅華 2026-03-22 3/150 2026-03-23 11:20 by barlinike
[考研] 一志愿武理材料工程348求调剂 +5  ̄^ ̄゜汗 2026-03-19 7/350 2026-03-22 19:44 by 公瑾逍遥
[考研] 324求调剂 +6 lucky呀呀呀鸭 2026-03-20 6/300 2026-03-22 16:01 by ColorlessPI
[考研] 材料求调剂 +5 @taotao 2026-03-21 5/250 2026-03-21 20:55 by lbsjt
[考研] 0805 316求调剂 +3 大雪深藏 2026-03-18 3/150 2026-03-21 18:55 by 学员8dgXkO
[考研] 工科0856求调剂 +3 沐析汀汀 2026-03-21 3/150 2026-03-21 18:30 by 学员8dgXkO
[考研] 299求调剂 +4 某某某某位 2026-03-21 4/200 2026-03-21 16:30 by barlinike
[考研] 材料与化工(0856)304求 B区 调剂 +3 邱gl 2026-03-21 3/150 2026-03-21 13:47 by lature00
[考研] 332求调剂 +3 凤凰院丁真 2026-03-20 3/150 2026-03-21 10:27 by luoyongfeng
[考研] 一志愿山大07化学 332分 四六级已过 本科山东双非 求调剂! +3 不想理你 2026-03-16 3/150 2026-03-21 03:59 by JourneyLucky
[考研] 求调剂 +3 Ma_xt 2026-03-17 3/150 2026-03-21 02:05 by JourneyLucky
[考研] 一志愿武理材料305分求调剂 +6 想上岸的鲤鱼 2026-03-18 7/350 2026-03-21 01:03 by JourneyLucky
[考研] 295求调剂 +4 一志愿京区211 2026-03-18 6/300 2026-03-20 23:41 by JourneyLucky
[考研] 一志愿 西北大学 ,070300化学学硕,总分287,双非一本,求调剂。 +4 晨昏线与星海 2026-03-19 4/200 2026-03-20 22:15 by JourneyLucky
[考研] 材料学硕297已过四六级求调剂推荐 +11 adaie 2026-03-19 11/550 2026-03-20 21:30 by laoshidan
[考研] 一志愿西南交通 专硕 材料355 本科双非 求调剂 +5 西南交通专材355 2026-03-19 5/250 2026-03-20 21:10 by JourneyLucky
[考研] 求调剂 +3 @taotao 2026-03-20 3/150 2026-03-20 19:35 by JourneyLucky
[考研] 288求调剂,一志愿华南理工大学071005 +5 ioodiiij 2026-03-17 5/250 2026-03-19 18:22 by zcl123
[考研] 0703化学调剂 +5 pupcoco 2026-03-17 8/400 2026-03-19 13:58 by houyaoxu
[考研] 一志愿福大288有机化学,求调剂 +3 小木虫200408204 2026-03-18 3/150 2026-03-19 13:31 by houyaoxu
信息提示
请填处理意见