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ELISA实验相关问题 已有6人参与
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操作步骤： （1）包被一抗（包被液：PH9.5碳酸盐缓冲液，抗体VEGF(1：1000),4℃过夜） （2）PBS-T20洗三次 （3）10%小牛血清PBS溶液，室温下封闭2h （4）PBS-T20洗三次 （5）加入样品，室温下孵育2h (6)PBS-T20洗五次 （7）二抗（10%小牛血清PBS溶液中加入兔的抗体按照1:2000） (8)PBS-T20洗七次 （9）加入底物反应液，黑暗下半个小时 （10）加入中止液，测量 以上是我的操作步骤，结果无论是标准品还是样品值都差不多，没有梯度，而且加入底物反应液后溶液很快就变成蓝色，也没有梯度，加入中止液变成黄色，肉眼看都是一样大的，不知道问题出现在哪里？？？？求大神帮忙解决！ |
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