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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 抗体/Elisa » ELISA结果分析
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中庸001

金虫 (小有名气)

[求助] ELISA结果分析 已有1人参与

ELISA实验结果
0为对照   1没有任何物品  2、3、4管的抗原浓度依次递增，出现的结果如此乱，求大神分析

ELISA结果分析
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1楼 2014-06-03 21:33:58
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

寂静之林

银虫 (小有名气)
楼主还是详细的说一下整个实验过程吧！
上面的数据一共是4行5列，如果每一列都像楼主说的那样加样，那么每一行之间有什么不一样呢？
然后这是什么反应模式（夹心法？间接法？）测定什么标志物（抗原、抗体）？
你的实验里，抗原是起什么作用的？
所以最好有详细的实验记录，这样才能分析是哪里出问题了
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5楼2014-06-05 11:59:35
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寂静之林

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
中庸001: 金币+3, ★有帮助 2014-06-07 20:39:58
标记HRP，底物不是TMB+过氧化物，如果是这个底物的话，单波长检测应该是450，双波长是450+630的，为什么你的会是492的？
感觉你的实验设计本身就有点问题。整个实验，根据你的实验操作和我过往的经验，我认为是摸索合适的抗原包被浓度。为了这样的实验目的，我会包被不同抗原浓度梯度（0.1μg/mL~5μg/mL）的反应板，包被、封闭之后，就正式开始实验，然后把一抗稀释成两个（阴性和阳性）或多个（梯度稀释，加零浓度点）浓度，加到反应板里孵育，孵育完了就洗板，加酶标二抗，在孵育，这次孵育完了以后，洗板加显色液。
对于你这个结果，可以说这次试验是废了。虽然是不同抗原浓度，有不同的OD值，但阳性的OD值太低了，连0.1都不要，可能的原因有：
1、检测的波长不对；
2、抗原没有包被到反应板上；
3,、抗原跟一抗没反应；
4、一抗跟二抗没反应；
5、二抗没有标记酶；（可能性不大）
6、显色液的有问题：配制出问题了，或不是合适的显色液；
总的来说，这样的数据是没办法分析的，只能是重新做实验，看看是哪部分出问题了。
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10楼2014-06-06 12:58:35
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寂静之林

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
11楼: Originally posted by 中庸001 at 2014-06-07 11:09:20
我用的底物是邻苯二胺 测定波长为492，又完全相同的重复了一次全过程，得到的结果对比很明显，是理想的结果。因此就更想弄清楚这次是什么原因造成的了ps:理想结果使用的试剂依旧是这次试验的。实验就是摸索合适的抗 ...

想要弄清实验失败的原因，那就要你自己去对比分析了。
成功实验和失败实验使用的试剂，完全一样（指同时配制）的话，那就可能是在实验某一步操作中出现了问题，这就要你自己查看实验记录或仔细回忆两次实验之间的操作有什么不一样的了。如果试剂不是同时配制的话，就更加要注意试剂有没有配制错误了。
失败和成功的实验，整个过程中，肯定会有一点差异的东西，那一点差异就导致了你之前的实验失败。
最后，如果这样还不能找到实验失败的原因的话，那就记录成功实验的每个步骤，保证以后的实验都是成功的，并详细做好实验记录，方便自己对实验结果进行分析，并避免因为同样的原因而导致实验失败！
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12楼2014-06-07 18:52:18
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中庸001

金虫 (小有名气)
1为对照，2没有任何物品，3、4、5管抗原浓度依次递增，上面写茬了
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2楼2014-06-03 21:35:38
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寂静之林

银虫 (小有名气)
图片好小啊，看到眼睛都花了，都没看清楚。。。。
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3楼2014-06-05 00:01:33
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中庸001

金虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 寂静之林 at 2014-06-05 00:01:33
图片好小啊，看到眼睛都花了，都没看清楚。。。。

亲，这下看清了，分析分析吧
ELISA结果分析-1
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4楼2014-06-05 08:57:24
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寂静之林

银虫 (小有名气)
补充一下，对这份数据，有点不明白的是，有些数据前面有条横杆（-），那是负号呢？还是其他没意义的符号？
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6楼2014-06-05 12:00:54
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中庸001

金虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by 寂静之林 at 2014-06-05 11:59:35
楼主还是详细的说一下整个实验过程吧！
上面的数据一共是4行5列，如果每一列都像楼主说的那样加样，那么每一行之间有什么不一样呢？
然后这是什么反应模式（夹心法？间接法？）测定什么标志物（抗原、抗体）？
你 ...

用的间接法。样不多，1号管是对照，2号是空管，3、4、5管抗原浓度分别为0.01ug/100uL   0.10ug/100uL   1.00ug/100uL  分别有4个重复。之后测OD492数值有正有负。
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7楼2014-06-05 15:18:35
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寂静之林

银虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by 中庸001 at 2014-06-05 15:18:35
用的间接法。样不多，1号管是对照，2号是空管，3、4、5管抗原浓度分别为0.01ug/100uL   0.10ug/100uL   1.00ug/100uL  分别有4个重复。之后测OD492数值有正有负。...

间接法？待测物质是抗原吗？
间接法，抗原一般都是包被在微孔板上面的，我还没听说过有间接法在实验过程中（包括加样）加入抗原的。
请问你用的标记物是HRP吗？还是其他的酶标物？
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8楼2014-06-05 17:06:07
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中庸001

金虫 (小有名气)
引用回帖:
8楼: Originally posted by 寂静之林 at 2014-06-05 17:06:07
间接法？待测物质是抗原吗？
间接法，抗原一般都是包被在微孔板上面的，我还没听说过有间接法在实验过程中（包括加样）加入抗原的。
请问你用的标记物是HRP吗？还是其他的酶标物？...

是HRP
间接法是首先把抗原包被在微孔板上，之后用一抗，然后二抗，最后检测结果。
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9楼2014-06-06 10:58:37
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