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中庸001金虫 (小有名气)
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ELISA实验结果 0为对照 1没有任何物品 2、3、4管的抗原浓度依次递增，出现的结果如此乱，求大神分析  0IO$DQU2ACSY6$3]{66]LR4.jpg |
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5楼2014-06-05 11:59:35
【答案】应助回帖
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中庸001: 金币+3, ★有帮助 2014-06-07 20:39:58
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标记HRP，底物不是TMB+过氧化物，如果是这个底物的话，单波长检测应该是450，双波长是450+630的，为什么你的会是492的？ 感觉你的实验设计本身就有点问题。整个实验，根据你的实验操作和我过往的经验，我认为是摸索合适的抗原包被浓度。为了这样的实验目的，我会包被不同抗原浓度梯度（0.1μg/mL~5μg/mL）的反应板，包被、封闭之后，就正式开始实验，然后把一抗稀释成两个（阴性和阳性）或多个（梯度稀释，加零浓度点）浓度，加到反应板里孵育，孵育完了就洗板，加酶标二抗，在孵育，这次孵育完了以后，洗板加显色液。 对于你这个结果，可以说这次试验是废了。虽然是不同抗原浓度，有不同的OD值，但阳性的OD值太低了，连0.1都不要，可能的原因有： 1、检测的波长不对； 2、抗原没有包被到反应板上； 3,、抗原跟一抗没反应； 4、一抗跟二抗没反应； 5、二抗没有标记酶；（可能性不大） 6、显色液的有问题：配制出问题了，或不是合适的显色液； 总的来说，这样的数据是没办法分析的，只能是重新做实验，看看是哪部分出问题了。 |
10楼2014-06-06 12:58:35
【答案】应助回帖
|
想要弄清实验失败的原因，那就要你自己去对比分析了。 成功实验和失败实验使用的试剂，完全一样（指同时配制）的话，那就可能是在实验某一步操作中出现了问题，这就要你自己查看实验记录或仔细回忆两次实验之间的操作有什么不一样的了。如果试剂不是同时配制的话，就更加要注意试剂有没有配制错误了。 失败和成功的实验，整个过程中，肯定会有一点差异的东西，那一点差异就导致了你之前的实验失败。 最后，如果这样还不能找到实验失败的原因的话，那就记录成功实验的每个步骤，保证以后的实验都是成功的，并详细做好实验记录，方便自己对实验结果进行分析，并避免因为同样的原因而导致实验失败！ |
12楼2014-06-07 18:52:18
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2楼2014-06-03 21:35:38
3楼2014-06-05 00:01:33
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4楼2014-06-05 08:57:24
6楼2014-06-05 12:00:54
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7楼2014-06-05 15:18:35
8楼2014-06-05 17:06:07
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9楼2014-06-06 10:58:37
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