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【求助/交流】ELIsa间接法中,如何提高阳性值?
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zsm0507
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[交流]
【求助/交流】ELIsa间接法中,如何提高阳性值?
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ELIsa间接法中,如何提高阳性值,在抗原浓度不变的情况下?谢谢了
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1楼
2010-09-23 09:59:31
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★ ★
lstt09nk(金币+2):感谢交流~~ 2010-09-25 21:43:08
lstt09nk:你可以把你的问题都整合到一楼,这样便于大家阅读~~ 2010-09-25 21:44:23
补充说明一下,我用自己的抗原包被的板子,用我自己的酶标二抗和显色液做,阳性值很低,为OD 0.5但是用我买的试剂盒中的酶标二抗和显色液做,阳性值却很高OD 1.4,这样看来我的抗原应该没问题,好像问题出在酶标二抗上,求大家帮着分析下吧
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2楼
2010-09-23 10:18:10
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amisking(金币+2):鼓励交流! 2010-09-23 19:01:55
lstt09nk(金币+1):感谢参与~ 2010-09-25 21:43:21
zsm0507(金币+1): 2010-09-27 13:25:00
zsm0507(金币+1): 2010-11-23 10:26:39
如果你的酶标二抗质量好的话可以增加酶标二抗的使用浓度,即降低酶标的稀释度
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3楼
2010-09-23 15:45:17
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可以试一试三楼的方法
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4楼
2010-09-23 16:23:41
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可是增加酶标二抗的浓度的话,阴性数也会提高的的呀?怎样才能使阳性值提高,而阴性值提高相对不多呢
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5楼
2010-09-24 09:34:23
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lstt09nk(金币+2):鼓励交流,欢迎常来~~ 2010-09-25 21:45:48
zsm0507(金币+3): 2010-09-27 13:24:27
引用回帖:
Originally posted by
zsm0507
at 2010-09-23 10:18:10:
补充说明一下,我用自己的抗原包被的板子,用我自己的酶标二抗和显色液做,阳性值很低,为OD 0.5但是用我买的试剂盒中的酶标二抗和显色液做,阳性值却很高OD 1.4,这样看来我的抗原应该没问题,好像问题出在酶标二 ...
先要确定两种酶标二抗使用的是不是同一批包被的板,因为虽然是相同的抗原,可能两次包被不一样。
如果是同一批板,出现这种情况只能说明你的酶标二抗失活了,买新的二抗,按说明书上的稀释倍数稀释;
阴性对照有颜色很可能是没封闭好。
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2010-09-25 15:30:14
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zsm0507(金币+2): 2010-09-27 13:24:46
zsm0507(金币+1): 2010-11-23 10:27:36
酶标二抗效价低,或者浓度低;显色液显色效果不行,优化显色液。
只换二抗或者显色液试试看,就知道问题所在
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思想是能力和力量的源泉
7楼
2010-09-25 18:24:36
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我自己的抗原,二抗,显色液
1 2
1:40000 0.536 0.66
0.288 0.173
0.422 0.476
0.156 0.495
1 2
1:80000 0.406 0.452
0.184 0.106
0.253 0.287
0.09 0.268
1 2
1:100000 0.365 0.372
0.171 0.085
0.271 0.247
0.085 0.229
我的抗原, 试剂盒二抗和显色液
1.205 0.936
0.125 0.072
0.425 0.433
0.065 0.173
试剂盒的抗原,我的二抗和显色液
2 0.435
6 0.111
7 0.082
8 0.122
注:1.2均是阳性,其余345678是阴性,大家帮着分析下吧,感激不尽!
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2010-09-26 08:44:40
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高手现身帮帮忙呀?
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zsm0507(金币+2): 2010-09-28 13:16:46
zsm0507(金币+3): 2010-11-23 10:27:25
你的二抗是什么牌子的?我们买的sigma原装的也只是稀释一万倍,你稀释多了。
阴性是做的三个平行,可是平行性不好,OD0.2以下的视为阴性,因为超出了读数范围;
你封闭液是什么?底物用的是什么,TMB?
你用你的抗原加试剂盒的试剂做出来颜色浅这很正常的,因为抗原可能不同,最关键的是你的一抗都用的是一样的吗?
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