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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】ELIsa间接法中，如何提高阳性值？
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zsm0507

金虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】ELIsa间接法中，如何提高阳性值？ 已有1人参与

ELIsa间接法中，如何提高阳性值，在抗原浓度不变的情况下？谢谢了
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1楼 2010-09-23 09:59:31
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zsm0507

金虫 (小有名气)
★ ★
lstt09nk(金币+2):感谢交流~~ 2010-09-25 21:43:08
lstt09nk:你可以把你的问题都整合到一楼，这样便于大家阅读~~ 2010-09-25 21:44:23
补充说明一下，我用自己的抗原包被的板子，用我自己的酶标二抗和显色液做，阳性值很低，为OD 0.5但是用我买的试剂盒中的酶标二抗和显色液做，阳性值却很高OD 1.4，这样看来我的抗原应该没问题，好像问题出在酶标二抗上，求大家帮着分析下吧
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2楼2010-09-23 10:18:10
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yaojc

木虫 (正式写手)
★ ★ ★
amisking(金币+2):鼓励交流！ 2010-09-23 19:01:55
lstt09nk(金币+1):感谢参与~ 2010-09-25 21:43:21
zsm0507(金币+1): 2010-09-27 13:25:00
zsm0507(金币+1): 2010-11-23 10:26:39
如果你的酶标二抗质量好的话可以增加酶标二抗的使用浓度，即降低酶标的稀释度
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专注、专心、专业
3楼2010-09-23 15:45:17
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s1d2w2

木虫 (正式写手)
可以试一试三楼的方法
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4楼2010-09-23 16:23:41
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zsm0507

金虫 (小有名气)
可是增加酶标二抗的浓度的话，阴性数也会提高的的呀？怎样才能使阳性值提高，而阴性值提高相对不多呢
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5楼2010-09-24 09:34:23
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三妹妹

金虫 (小有名气)
★ ★
lstt09nk(金币+2):鼓励交流，欢迎常来~~ 2010-09-25 21:45:48
zsm0507(金币+3): 2010-09-27 13:24:27
引用回帖:
Originally posted by zsm0507 at 2010-09-23 10:18:10:
补充说明一下，我用自己的抗原包被的板子，用我自己的酶标二抗和显色液做，阳性值很低，为OD 0.5但是用我买的试剂盒中的酶标二抗和显色液做，阳性值却很高OD 1.4，这样看来我的抗原应该没问题，好像问题出在酶标二 ...

先要确定两种酶标二抗使用的是不是同一批包被的板，因为虽然是相同的抗原，可能两次包被不一样。
如果是同一批板，出现这种情况只能说明你的酶标二抗失活了，买新的二抗，按说明书上的稀释倍数稀释；
阴性对照有颜色很可能是没封闭好。
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6楼2010-09-25 15:30:14
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richujs

木虫 (正式写手)
zsm0507(金币+2): 2010-09-27 13:24:46
zsm0507(金币+1): 2010-11-23 10:27:36
酶标二抗效价低，或者浓度低；显色液显色效果不行，优化显色液。
只换二抗或者显色液试试看，就知道问题所在
赞一下 回复此楼
思想是能力和力量的源泉
7楼2010-09-25 18:24:36
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zsm0507

金虫 (小有名气)
我自己的抗原，二抗，显色液
                  1        2                               
1:40000        0.536        0.66               
        0.288        0.173               
        0.422        0.476               
        0.156        0.495               
                  1              2
1:80000        0.406        0.452               
        0.184        0.106
        0.253        0.287               
        0.09        0.268
        1               2               
1:100000  0.365        0.372
              0.171          0.085
              0.271        0.247
              0.085         0.229
        我的抗原， 试剂盒二抗和显色液       
             1.205        0.936
         0.125        0.072
         0.425        0.433
         0.065        0.173
  试剂盒的抗原，我的二抗和显色液
   
    2   0.435

    6      0.111       
    7     0.082       
    8      0.122       

                                               
注：1.2均是阳性，其余345678是阴性，大家帮着分析下吧，感激不尽！
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8楼2010-09-26 08:44:40
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zsm0507

金虫 (小有名气)
高手现身帮帮忙呀？
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9楼2010-09-27 10:24:40
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三妹妹

金虫 (小有名气)
zsm0507(金币+2): 2010-09-28 13:16:46
zsm0507(金币+3): 2010-11-23 10:27:25
你的二抗是什么牌子的？我们买的sigma原装的也只是稀释一万倍，你稀释多了。
阴性是做的三个平行，可是平行性不好，OD0.2以下的视为阴性，因为超出了读数范围；
你封闭液是什么？底物用的是什么，TMB？
你用你的抗原加试剂盒的试剂做出来颜色浅这很正常的，因为抗原可能不同，最关键的是你的一抗都用的是一样的吗？
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10楼2010-09-28 08:39:04
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