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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 为什么我作ELISA，结果是为负数
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纯渴

金虫 (正式写手)

[交流] 为什么我作ELISA，结果是为负数

我做肝细胞上清作ELISA，标准曲线做了，带到自己的实验组里去，发现结果都为负数，查文献看人家的图怎么样也有十几的，不知道是什么原因，哪位大侠可以帮忙下，结果附下图
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    • 2011-12-11 21:29:00, 19.5 K

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1楼 2011-12-11 21:33:57
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纯渴

金虫 (正式写手)
引用回帖:
楼: Originally posted by dy_414 at 2011-12-12 14:20:56:
第一可能是波长不对，可能是酶标仪上显示的波长和实际的滤光片不对应，换句话说就是比如选的是450nm的波长，但是实际在450的位置装的是655nm的滤光片。

第二可能是溶液里有沉淀

第三可能是板子脏了，如果有 ...

谢谢，我用的是现买的ELISA板，，第三个原因可以去除，现在在考虑是不是细胞密度太少了，导致浓度过低，不在检测范围之内，所以导致了负值，还望大家给予解答
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5楼2011-12-13 19:07:13
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纯渴

金虫 (正式写手)
附表没写清楚，做了说明的在Word里
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    • 2011-12-11 21:34:50, 85 K
2楼2011-12-11 21:35:33
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liuyuncun

金虫 (小有名气)
★
纯渴(金币+1):谢谢参与
纯渴(金币+2): 2011-12-13 19:07:34
我看了一下你做的图，感觉有点别扭呢，一般都是OD值当纵坐标，浓度当横坐标的。浓度和OD值负相关，你的结果是负数，按照标准曲线应该是OD值太高了，含量是零啊，你觉得呢？
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3楼2011-12-12 08:32:25
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dy_414

木虫 (正式写手)
★
纯渴(金币+1):谢谢参与
纯渴(金币+3): 2011-12-13 19:07:25
第一可能是波长不对，可能是酶标仪上显示的波长和实际的滤光片不对应，换句话说就是比如选的是450nm的波长，但是实际在450的位置装的是655nm的滤光片。

第二可能是溶液里有沉淀

第三可能是板子脏了，如果有能冲洗的洗板机可以冲洗bottom，或者洗瓶冲干净用滤纸吸干，然后双波长检测
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4楼2011-12-12 14:20:56
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dy_414

木虫 (正式写手)
引用回帖:
5楼: Originally posted by 纯渴 at 2011-12-13 19:07:13:
谢谢，我用的是现买的ELISA板，，第三个原因可以去除，现在在考虑是不是细胞密度太少了，导致浓度过低，不在检测范围之内，所以导致了负值，还望大家给予解答

浓度过低有可能，因为噪音是可以是负数的，但是结果全是负数可能就是系统有问题。标准品和样品是同样的溶剂系统么？
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7楼2011-12-13 22:25:42
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纯渴

金虫 (正式写手)
引用回帖:
楼: Originally posted by dy_414 at 2011-12-13 22:25:42:
浓度过低有可能，因为噪音是可以是负数的，但是结果全是负数可能就是系统有问题。标准品和样品是同样的溶剂系统么？

标准品是试剂盒里面给的，样本呢是取上清用DMEM作培养基的
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8楼2011-12-16 14:52:27
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dy_414

木虫 (正式写手)
引用回帖:
8楼: Originally posted by 纯渴 at 2011-12-16 14:52:27:
标准品是试剂盒里面给的，样本呢是取上清用DMEM作培养基的

那问题基本就找到了,ELISA中样品的稀释液变了结果会发生巨大的变化。

你可以用样品的稀释液稀释一下标准品，然后把浓度算回去。
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9楼2011-12-16 16:29:10
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mlanqiang6楼
2011-12-13 19:57  
纯渴(金币+1):谢谢参与
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