应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 网络生活区 » 有奖问答 » 实验讨论 » 噬菌体淘选之后做ELISA没结果的问题
71/1返回列表
查看: 3182  |  回复: 6
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

zqh2912

新虫 (初入文坛)

[求助] 噬菌体淘选之后做ELISA没结果的问题

我现在做的是用噬菌体展示技术直接淘选硫酸软骨素，以期得到与硫酸软骨素的结合肽以作进一步的实验。现在一共进行了5轮淘选（一般而言，3轮就够了）从洗脱物的滴度来看，有富集表现，但是也不算明显（1此方，2此方，2此方，3此方）。不过每轮扩增后的滴度都能在10的11此方级别。现在的问题是，用这样的淘选物去做ELISA，与对照相比没有结果。其中：1，硫酸软骨素是一个黏多糖，不太好包被，但是也有文献说明可以包被上去。2，做ELISA时都有阳性对照，所以可以排除手法问题。而我的问题是：1，为什么都是包被相同的分子，洗脱液及封阻液都相同，但是经淘选得出的洗脱物却不能通过ELISA检验？2,如果淘选出的是非特异性的，那么这些Phage是和什么结合了，是BSA封阻液还是就是96微孔板？3，如何解决现在的问题？谢谢各位大虾指导哈~
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2011-05-31 16:40:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

limichuan

金虫 (正式写手)

免疫学实验超人qq：858200882

【答案】应助回帖

zqh2912(金币+5): 要是能再多些帮助就好了，但是还是谢谢，毕竟是第一次发帖~ 2011-06-10 20:12:44
傻傻的问句，楼主是用间接法做的吗，
赞一下 回复此楼
本公司专业从事蛋白纯化，抗体制备等免疫实验技术服务。欢迎咨询qq：858200882
2楼2011-06-01 03:21:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zqh2912

新虫 (初入文坛)
弱弱的回答下：淘选和ELISA都是用的直接法哈。用的是NEB的噬菌体库，在最后一步的时候我严格了淘选条件，之前一直以为是不够严格所以没有淘到特异性的Phage，昨天和师姐讨论了下， 她说有可能是太严格了导致特异性的都没留下来，而一直洗脱，扩增的都是非特异的。请问有这样的可能吗？
赞一下 回复此楼
3楼2011-06-02 09:18:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

limichuan

金虫 (正式写手)

免疫学实验超人qq：858200882
有的，如果你特异性的少那么同样的扩增实际上就等于稀释了。你可以想办法增加特异性比例再扩增。
赞一下 回复此楼
本公司专业从事蛋白纯化，抗体制备等免疫实验技术服务。欢迎咨询qq：858200882
4楼2011-06-11 13:39:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zqh2912

新虫 (初入文坛)
谢谢！但是我也是这么想的，所以严格了条件，然后在严格条件之下得到的便被理解为了特异性的（因为我想非特异性的无法通过更严格的条件），但是现在师姐的意思是，无论严格与非严格，事实上都会有phage留下，而严格的后果是可能将潜在的特异性phage去除，产生假阳性结果。而我后面又做了一次未包被靶分子的空白对照，确实仍然有phage留下，但是比例为正常组百分之一，当然经过扩增后其滴度会极大的提高，但是仍然有矛盾之处。另外，请问如何提高特异性的？
赞一下(2人) 回复此楼
5楼2011-06-17 10:32:52
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

moyixq

铜虫 (小有名气)
用什么洗脱的是gly hcl还是特异洗脱
赞一下 回复此楼
要和相投的人做实验才会高兴
6楼2012-06-01 14:53:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

顺水飘扬

新虫 (初入文坛)
遇到同样的问题，楼主找到解决方案了么
赞一下(1人) 回复此楼
7楼2015-12-23 15:37:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 zqh2912 的主题更新
71/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[论文投稿] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +3 cqwQDCxMcL3I 2026-09-29 4/200 2026-09-30 16:45 by Z9YWQ5EAO3qp
[找工作] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +3 cqwQDCxMcL3I 2026-09-29 4/200 2026-09-30 16:33 by Z9YWQ5EAO3qp
[教师之家] 某top大学教授说“能够在市场中兑现的能力才是真能力”无比同意！ +10 zju2000 2026-09-26 13/650 2026-09-30 10:26 by yexuqing
[有机交流] 同一个分子，一条来自文献，一条来自AI——不告诉你答案，你会选哪条？ +4 tianxiaoxian 2026-09-28 7/350 2026-09-30 08:34 by 88817753
[博后之家] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +4 IDs3scOF0tjC 2026-09-28 4/200 2026-09-29 19:27 by cqwQDCxMcL3I
[找工作] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +4 ZYXdhzDAy9ZX 2026-09-28 4/200 2026-09-29 16:54 by yCO1Ll7aHtsw
[硕博家园] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +3 ZYXdhzDAy9ZX 2026-09-28 3/150 2026-09-29 16:03 by etmYJ6d2rquH
[论文投稿] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 tqUTOxClQUMF 2026-09-28 4/200 2026-09-29 15:15 by etmYJ6d2rquH
[博后之家] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 tqUTOxClQUMF 2026-09-28 3/150 2026-09-29 15:04 by etmYJ6d2rquH
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +3 tqUTOxClQUMF 2026-09-28 3/150 2026-09-29 14:58 by etmYJ6d2rquH
[考博] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +6 GDBe8tDZqE8z 2026-09-28 6/300 2026-09-29 14:41 by etmYJ6d2rquH
[博后之家] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +6 IDs3scOF0tjC 2026-09-28 7/350 2026-09-29 14:07 by etmYJ6d2rquH
[公派出国] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +4 IDs3scOF0tjC 2026-09-28 5/250 2026-09-29 13:50 by etmYJ6d2rquH
[考研] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +3 tqUTOxClQUMF 2026-09-28 3/150 2026-09-29 09:59 by JzYBbHIXWSrW
[教师之家] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +4 GDBe8tDZqE8z 2026-09-28 4/200 2026-09-29 09:49 by JzYBbHIXWSrW
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 tqUTOxClQUMF 2026-09-28 3/150 2026-09-28 23:46 by b8fCuTHqckEt
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 CfXuS1rDhLYN 2026-09-28 4/200 2026-09-28 22:55 by ez6fGg9abYaj
[公派出国] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +4 IDs3scOF0tjC 2026-09-28 4/200 2026-09-28 22:55 by ez6fGg9abYaj
[找工作] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +3 IDs3scOF0tjC 2026-09-28 5/250 2026-09-28 22:32 by ez6fGg9abYaj
[论文投稿] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 CfXuS1rDhLYN 2026-09-28 3/150 2026-09-28 19:08 by 9lS3ad5oOymn
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭